[发明专利]一种增殖细胞核抗原的偶联方法在审
| 申请号： | 201910261654.2 | 申请日： | 2019-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN109946453A | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 曾敏霞;王国磊;陈敏华;储迅涛;邓京 | 申请（专利权）人： | 珠海丽珠试剂股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543 |
| 代理公司： | 北京超成律师事务所 11646 | 代理人： | 滕俊强 |
| 地址： | 519000 广东省珠海市香*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 增殖细胞核抗原 偶联 醋酸盐溶液 目标抗体 目标抗原 偶联反应 偶联效率 微粒载体 有效解决 抗原 活化 羧化 检测 应用 发现 | ||
1.一种增殖细胞核抗原的偶联方法，其特征在于，活化的羧化微粒在醋酸盐溶液中与增殖细胞核抗原进行偶联反应。
2.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述醋酸盐溶液中的醋酸盐的浓度为10-100mM，pH为5±0.2，所述醋酸盐溶液中还含有氯化钠，所述氯化钠在所述醋酸盐溶液中的浓度为0-0.3M；
优选地，所述醋酸盐溶液中的醋酸盐的浓度为20-50mM；
优选地，所述氯化钠在所述醋酸盐溶液中的浓度为0.1-0.2M；
优选地，所述醋酸盐溶液的组分为醋酸盐和醋酸；
优选地，所述醋酸盐为醋酸钠。
3.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述偶联反应中，所述醋酸盐溶液的体积为50-200μL，优选为100-200μL。
4.根据权利要求3所述的偶联方法，其特征在于，所述增殖细胞核抗原的添加量为10-30ng，优选为20±5ng。
5.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述偶联反应为：在室温条件下震荡1-3h，优选为1.5-2.5h。
6.根据权利要求5所述的偶联方法，其特征在于，所述震荡的条件为1000±200rpm。
7.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，偶联反应结束后经封闭处理，悬浮即可；
进一步地，所述封闭处理采用的封闭液为牛血清白蛋白溶液，所述牛血清白蛋白溶液中的牛血清白蛋白的质量浓度为1％±0.2％。
8.根据权利要求7所述的偶联方法，其特征在于，所述封闭处理为先采用所述封闭液洗涤1-3次，然后加入所述封闭液，以1000±200rpm进行震荡处理50-80min。
9.根据权利要求7所述的偶联方法，其特征在于，所述悬浮采用含有质量浓度为1％±0.2％的牛血清白蛋白的PBST进行。
10.根据权利要求1-9任一项所述的偶联方法，其特征在于，所述微粒为磁微粒、硅微粒、银微粒、金微粒或其复合微粒；
进一步地，所述羧化微粒采用以下方法活化：微粒悬浮液中加入NHS溶液和EDC溶液处理。
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