[发明专利]蛋白、缀合物、药物组合物、DNA构建体、宿主细胞及制备人SIRPα融合蛋白的方法

说明书

本申请公开了抑制CD47+疾病细胞的生长和/或增殖的蛋白、缀合物、药物组合物、DNA构建体、生产蛋白质的宿主细胞及制备人SIRPα融合蛋白的方法。所述蛋白是由SEQ ID NO.26构成的人SIRPα融合蛋白。该融合蛋白的有效性比缺乏效应子功能的对应物高至少5倍。

本申请是申请日为2013年12月17日，发明名称为“用SIRPα-Fc融合蛋白处理CD47+疾病细胞”的中国专利申请No.201380073010.1的分案申请。

技术领域

本发明涉及治疗性的Fc融合蛋白，其特别用于治疗具有CD47+疾病细胞的对象。所述融合蛋白基于人SIRPα的胞外区域中的结构域，并且融合了增强该融合蛋白的抗癌效果的Fc区。

背景技术

信号调节蛋白α(SIRPα)是属于免疫球蛋白超家族的跨膜蛋白，并且其是CD47的受体。Ullrich等在US 6541615中描述了人类SIRPα的克隆与表达。Sarfati等在WO1999/040940中以及Van den Berg等在WO00/66159中暗示了SIRPα和CD47参与了癌症及其他疾病的病原学，并且Van den Berg等还提出了SIRPα抑制剂的治疗应用。最近，Jaiswal等在WO2009/091601中提出了CD47抗体在治疗血癌中的应用。SIRPα和CD47之间的相互作用在调节巨噬细胞对白血病细胞和白血病干细胞(LSC)的吞噬作用中起到十分重要的作用。已经示出了阻断抗CD47抗体能够促进巨噬细胞对LSC的吞噬作用。此外，在WO 2010/130053中，Wang等提出了基于SIRPα融合蛋白的癌症治疗。对于治疗免疫功能紊乱，Smith等在US2008/0131431中提出了使用基于CD47的Fc融合蛋白。Raymond等在WO2010/070047中也教导了治疗炎症和免疫功能紊乱。

提供通过SIRPα/CD47轴抑制信号转导的制剂以用于治疗癌症和其他疾病是有用的。

发明内容

本发明提供了作为Fc融合蛋白的SIRPα，其中选择了所述融合蛋白中的成分以使得对CD47/SIRPα轴实现最佳抑制。本发明的发明人已经发现，人SIRPα胞外区内的特定的单一结构域对CD47的结合亲和性大于人SIRPα的完整的胞外区。此外，本发明证明了当恒定(Fc)区具有效应子功能时，SIRPαFc融合蛋白在体内的效力令人惊奇地大幅度提高，尽管对CD47/SIRPα轴的抑制应该不需要这样的活性，并且尽管体外实验表明无效应子的Fc区应该是优选的。

本发明的SIRPαFc融合蛋白还显示了可忽略的CD47激动作用(agonism)，这允许它们在体内作为SIRPα介导的信号转导的专一性抑制剂。作为进一步的特征，所述融合蛋白显示了可忽略的红细胞(red blood cell)结合作用。这与该轴的其他抑制剂形成鲜明对比，例如CD47抗体，其与红细胞强结合，在一些情况下引起血细胞凝集。通过使用本发明的融合蛋白，不需要为了“沉积(sink)”效应来计算剂量，在“沉积”效应中，所施用的药物以RBC结合的形式变得被螯合并且失活，或者不需要为了由RBC相互作用引起的任何不利事件来计算剂量。

在本发明的一个方面，提供了SIRPαFc融合蛋白，其用于抑制SIRPα介导的细胞-结合CD47的刺激作用，该融合蛋白包含：SIRPα蛋白成分，以及与其融合的抗体恒定区(Fc)成分，其中所述SIRPα蛋白成分由人SIRPα的V结构域构成或包含人SIRPα的V结构域，并且Fc成分为具有效应子功能的IgG恒定区。在一些实施方案中，Fc选自IgG1抗体或IgG4抗体的恒定区。

在一个相关方面，提供了一种多核苷酸，其编码作为单链多肽的SIRPαFc融合蛋白的可分泌形式。在另一个相关方面，提供了用于生产SIRPαFc融合蛋白的细胞宿主，该宿主具有被引入并可在其中表达的多核苷酸。以及，在另一个实施方案中，提供了用于获得SIRPαFc融合蛋白的方法，包括培养所述宿主或使所述宿主生长，以及回收作为二聚体蛋白的SIRPαFc融合蛋白。在一些实施方案中，所述宿主为来自任意物种的能使所表达的蛋白糖基化的真核宿主。