[发明专利]一种甲流、乙流及腺病毒多重核酸检测引物探针组及其试剂盒

说明书

本发明提供了一种甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测引物探针组及其试剂盒和相关应用。所述引物组的序列如SEQ ID NO：1‑3、5、6、8‑12所示；所述探针组的序列如SEQ ID NO：4、7、13所示。本发明还提供了一种包括上述引物探针组的用于检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测的试剂盒和多重核酸检测扩增反应液和检测方法。本发明的引物探针组针对甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒核酸同时检测具有高特异性和灵敏度；用本发明的引物探针组制备的试剂盒操作快速、方法简便、检测的特异性好、灵敏度高且可以一管多检，彻底解决了现有技术中试剂盒检测效率低、特异性差以及灵敏度低的问题。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及一种甲流、乙流及腺病毒多重核酸检测引物探针组及其试剂盒和应用。

背景技术

呼吸道感染(Respiratorytract infection，RTI)是人类最常见的一类疾病，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。常见的病原体包括呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒、副流感病毒等。

目前呼吸道病原体检测的主要方法包括：病原体分离培养法、免疫法和分子检测法等。病毒分离培养是目前病毒病原学检测的金标准，但是对标本中病毒采集、运输及保存条件要求均较高，且操作复杂、耗时长、不稳定、敏感性不高，不适合临床检测应用。免疫法的特异性高，但灵敏度较低，且往往不可用于疾病的早期诊断。实时荧光定量PCR技术是目前应用最广泛的分子检测法，该技术不仅实现了对核酸模板的定量，而且具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高等特点。

目前国内应用荧光PCR技术进行甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒核酸检测的试剂盒主要为单重核酸检测试剂盒及甲/乙流双重检测试剂盒，不能同时检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒，且操作时间较长，操作繁琐。

因此，亟需一种灵敏度高、特异性强、覆盖面广、操作简便的甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒检测方法。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测引物探针组及其试剂盒和相关应用。

本发明的引物探针组包括用于靶序列扩增的上下游引物组和用于靶序列检测的探针组：

所述引物组的序列如SEQ ID NO：1-3、5、6、8-12所示；

所述探针组的序列如SEQ ID NO：4、7、13所示。

本发明还提供了一种甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测的试剂盒，包括核酸扩增反应缓冲液、浓度为100mM的dNTPs、Taq DNA聚合酶和M-MLV反转录酶，还包括上述引物探针组。

优选的，所述试剂盒还包括阳性对照、阴性对照和内标；所述阳性对照为灭活的甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒的混合物；所述阴性对照为灭菌生理盐水；所述内标为噬菌体MS2。

优选的，所述试剂盒还包括用于所述内标片段扩增的上下游引物和用于检测所述内标的探针；所述用于所述内标片段扩增的上下游引物的序列分别如SEQ ID NO：14和15所示；所述用于检测所述内标的探针的序列如SEQ ID NO：16所示。

优选的，上述序列如SEQ ID NO：4的探针的5’端和3’端分别标记Texas Red和BHQ2；上述序列如SEQ ID NO：7的探针的5’端和3’端分别标记FAM和BHQ1；上述序列如 SEQID NO：13的探针的5’端和3’端分别标记VIC和BHQ1。