[发明专利]一种甲流、乙流及腺病毒多重核酸检测引物探针组及其试剂盒在审
| 申请号： | 201910258332.2 | 申请日： | 2019-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN109897917A | 公开（公告）日： | 2019-06-18 |
| 发明（设计）人： | 李小锋;李晨阳;李娇娇 | 申请（专利权）人： | 广东和信健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京派特恩知识产权代理有限公司 11270 | 代理人： | 高文娟;张颖玲 |
| 地址： | 510530 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物探针 核酸检测 甲型流感病毒 乙型流感病毒 灵敏度 试剂盒 腺病毒 检测 扩增反应液 试剂盒操作 试剂盒检测 腺病毒核酸 探针组 引物组 甲流 制备 应用 | ||
1.一种甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括用于靶序列扩增的上下游引物组和用于靶序列检测的探针组：
所述引物组的序列如SEQ ID NO：1-3、5、6、8-12所示；
所述探针组的序列如SEQ ID NO：4、7、13所示。
2.一种甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测的试剂盒，包括核酸扩增反应缓冲液、浓度为100mM的dNTPs、Taq DNA聚合酶和M-MLV反转录酶，其特征在于，还包括如权利要求1所述的引物探针组。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照、阴性对照和内标；
所述阳性对照为灭活的甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒的混合物；
所述阴性对照为灭菌生理盐水；
所述内标为噬菌体MS2。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于所述内标基因扩增的上下游引物和用于检测所述内标基因的探针；
所述用于所述内标基因扩增的上下游引物的序列分别如SEQ ID NO：14和15所示；
所述用于检测所述内标基因的探针的序列如SEQ ID NO：16所示。
5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述序列如SEQ ID NO：4的探针的5’端和3’端分别标记Texas Red和BHQ2；
所述序列如SEQ ID NO：7的探针的5’端和3’端分别标记FAM和BHQ1；
所述序列如SEQ ID NO：13的探针的5’端和3’端分别标记VIC和BHQ1。
6.一种甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测扩增反应液，其特征在于，所述反应液包含如权利要求1所述引物探针组。
7.根据权利要求6所述的甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测扩增反应液，其特征在于，所述反应液还包含以下组分：核酸扩增反应缓冲液、浓度为100mM的dNTPs、Taq DNA聚合酶和M-MLV反转录酶；所述反应液各组分的终浓度如下：
8.一种甲型流感病毒、乙型流感病毒及腺病毒多重核酸检测的方法，其特征在于，所述方法为：将核酸扩增反应缓冲液、100mM浓度的dNTPs、Taq DNA聚合酶和M-MLV反转录酶和引物探针组按以下反应体系的终浓度配制成核酸扩增反应混合液进行PCR反应；
所述引物探针组如权利要求1所述；
所述反应体系的配比如下：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR反应按如下程序进行：
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