[发明专利]一种高纯度DNA模板的制备方法在审
| 申请号： | 201910253729.2 | 申请日： | 2019-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN109811034A | 公开（公告）日： | 2019-05-28 |
| 发明（设计）人： | 杨保伟;李怡谰;牛沁雅;盛焕精;曹晨阳;崔生辉;瞿洪仁 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 西安智萃知识产权代理有限公司 61221 | 代理人： | 李炳辉 |
| 地址： | 712100 陕西省咸阳市*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高纯度DNA 制备 混合菌液 无菌去离子水 离心机 除沉淀物 非特异性 高温裂解 降温冷却 扩增体系 扩增效率 裂解物 上清液 中高温 稀释 菌体 菌株 扩增 裂解 上经 冷却 | ||
1.一种高纯度DNA模板的制备方法，其特征在于是通过以下技术步骤制备完成的：
a.向灭菌的PCR管中加入无菌去离子水，标号注明，另备用同样容积灭菌的PCR管，标号注明；
b.将培养的菌株置于加有无菌去离子水的PCR管中形成混合菌液，混合菌液的浊度为0.1-0.2MCF；
c.将装有混合菌液的PCR管置于PCR仪中，在99-100℃温度下裂解10min，后降温至4℃冷却；
d.完成裂解后将PCR管置于冰水中水浴或在4℃冰箱内稳定3-5min， 然后在离心机上经12000-15000rpm离心2-3min，吸取上清液置于备用的PCR管中，弃除沉淀物，即获得高纯度DNA模板，保存于-40℃冰箱内；
e．在使用时，依据需求将获得的高纯度DNA模板直接或经稀释后加入PCR体系进行PCR扩增。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度DNA模板的制备方法，其特征在于：
a．向容积为200μL灭菌的PCR管中加入180μL无菌去离子水，标号注明；另备用同样容积灭菌的PCR管，标号注明；
b．用灭菌的牙签挑取1-2个单菌落均匀混悬于加入无菌去离子水的PCR管中形成混合菌液，混合菌液的浊度为0.1-0.2MCF；
c．将装有混合菌液的PCR管置于PCR仪中，在99℃温度下裂解10min，后降温至4℃冷却；
d.完成裂解后将PCR管置于冰水中水浴稳定5min，然后在离心机上经13200rpm离心2min，吸取上清液置于备用的PCR管中，弃除沉淀物，即获得130μL高纯度的DNA模板，保存于-40℃冰箱内；
e．在使用时，依据需求将获得的高纯度DNA模板直接加入PCR体系进行PCR扩增。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度DNA模板的制备方法，其特征在于：
a．向容积为200μL灭菌的PCR管中加入150μL无菌去离子水，标号备注；另备用同样容积灭菌的PCR管，标号注明；
b．用灭菌的移液枪枪头挑取菌苔均匀混悬于加入无菌去离子水的PCR管中形成混合菌液，混合菌液的浊度为0.1-0.2MCF；
c．将装有混合菌液的PCR管置于PCR仪中，在99℃温度下裂解10min，后降温至4℃冷却；
d.完成裂解后将PCR管置于4℃冰箱内稳定5min，然后在离心机上经12000rpm离心3min，吸取上清液置于备用的PCR管中，弃除沉淀物，即获得100μL高纯度的DNA模板，保存于-40℃冰箱内；
e．在使用时，依据需求将获得的高纯度DNA模板用无菌去离子水按梯度稀释后加入PCR体系进行PCR扩增。
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