[发明专利]一种猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括酶标板、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标猪伪狂犬病毒单克隆抗体、样品稀释液、20倍浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、终止液，其中所述酶标板包被有利用杆状病毒表达系统及细胞悬浮培养工艺表达的猪伪狂犬病毒gE蛋白，将其纯化后作为包被抗原，同时用作免疫原，制备并筛选出伪狂犬病毒gE蛋白的特异性单克隆抗体并进行过氧化物酶标记作为阻断酶标单抗。本发明试剂盒敏感性高、特异性好、且操作便捷，结果判定采用S/N比值法，准确度高，与进口试剂盒相比，检测符合率达98％以上。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及一种猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒及其应用，适用于种猪伪狂犬病毒gE抗体的特异、快速、准确检测。

背景技术

伪狂犬病(Pseudorabies)，又名奥耶斯基病(Aujeszky’s disease，AD)，是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的一种急性传染病。该病能够侵害包括猪、牛、绵羊、兔、狐狸、犬猫、雪貂、鼠、水貂等多种动物。猪是天然宿主和储存者，除了猪，其余动物发病后均出现瘙痒、高热和脑脊髓炎症状，甚至可导致死亡。猪感染PRV后主要引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎与种猪不育，哺乳仔猪出现神经症状后死亡率高，育成育肥猪呼吸道症状，PRV病毒感染易形成潜伏感染，导致长期带毒、向外界排毒；另外，PRV在应激条件下易被激活，可引起反复感染和散毒，因而该病的净化和根除对整个养猪业非常重要。

PRV病毒颗粒呈150～180nm的椭圆形或球状病毒颗粒，是典型的疱疹病毒结构，其由核蛋白核心、拥有162个壳粒的二十面体核衣壳、蛋白壳皮与脂质双层膜四部分组成。gE是非PRV复制必须的囊膜蛋白，含有577个氨基酸残基，是一种异二聚体的膜蛋白，在α疱疹病毒中高度保守，介导PRV与受感染动物细胞之间的融合，促使PRV扩散与PRV的释放，促进嗜神经向性。

在我国，预防、控制和根除伪狂犬病是当前面临的一项艰巨的任务，目前市场上使用的猪伪狂犬疫苗绝大多数是缺失gE基因与TK基因的弱毒疫苗。疫苗免疫后，动物体内检测不到针对gE的抗体，而感染野毒株后，由于野毒株含有gE基因，因此感染野毒株的动物体内能够检测到gE抗体，从而可以通过检测血清样品中是否存在gE抗体来判断动物是否感染野毒。

目前，酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA)是市场上主流的免疫测定技术，已广泛应用于临床检测，快速便捷且灵敏度高，且不需要特殊的仪器设备，可用于猪伪狂犬病毒的抗体检测。目前市场上，用于检测猪伪狂犬病毒抗体的试剂盒多为间接ELISA抗体检测试剂盒，该方法的敏感性和特异性在检测猪伪狂犬病毒抗体水平上有一定的局限性，对于包被抗原纯度的要求比较高，否则容易出现假阳性和假阴性。

本发明是基于针对猪伪狂犬病毒gE的特异性单克隆抗体的阻断ELISA抗体检测方法，使得该试剂盒具有很好的敏感性和特异性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种敏感性高、特异性强、能够快速、简便地检测猪伪狂犬病毒gE抗体的阻断ELISA试剂盒。

该试剂盒的优点之一是使用了辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体，提高了检测的敏感性和特异性。

基于上述目的，本发明的猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒，包括以猪伪狂犬病毒gE蛋白为包被抗原的的酶联反应板和酶标抗体；所述酶标抗体为与猪伪狂犬病毒gE蛋白特异性结合的单克隆抗体(PRV-Mc2)制成的酶标抗体。所述酶标抗体优选为经辣根化物酶标记抗体，所述辣根过氧化物酶可通过戊二醛法或过碘酸法交联在抗体上。

优选的，所述猪伪狂犬病毒gE蛋白为利用杆状病毒表达系统以及昆虫细胞悬浮培养工艺表达获得猪伪狂犬病毒gE纯化蛋白。猪伪狂犬病毒gE纯化蛋白的序列为序列表中序列6。