[发明专利]一种猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒，包括酶联反应板和酶标抗体，其中所述酶联反应板包被有猪伪狂犬病毒gE蛋白，酶标抗体为用辣根过氧化物酶标记的抗猪伪狂犬病毒gE蛋白的单克隆抗体；所述酶联反应板为可拆卸96孔酶标板；所述猪伪狂犬病毒gE蛋白为利用杆状病毒表达系统以及昆虫细胞悬浮培养工艺表达获得；所述猪伪狂犬病毒gE蛋白的序列为序列表中序列6；所述抗猪伪狂犬病毒gE蛋白的单克隆抗体，含有重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区和轻链可变区均由决定簇互补区和框架区组成；

所述重链可变区和所述轻链可变区的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；

所述重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第25~34位氨基酸所示；

所述重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第52~59位氨基酸所示；

所述重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第94~108位氨基酸所示；

所述轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第24~35位氨基酸所示；

所述轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第50~59位氨基酸所示；

所述轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第94~100位氨基酸所示。

2.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1的第1~123位所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2的第1~117位所示。

3.根据权利要求2所述的猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述酶联反应板的获得方法是将所述猪伪狂犬病毒gE蛋白溶于100μl的 pH 9.6的碳酸盐溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶联反应板，每孔0.1μg~1μg猪伪狂犬病毒gE蛋白，2~8℃下放置8~12小时，使包被抗原与酶联反应板充分结合，然后按照300μl/孔加入含有10mg/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS缓冲液，37℃封闭处理2~3小时，甩干后，待酶联反应板干燥后4℃密封保存。

4.根据权利要求2所述的猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括底物液A、底物液B和终止液；所述底物液A为含0.6mg/ml过氧化氢尿素的柠檬酸磷酸盐缓冲液，所述底物液B为0.2mg/ml的四甲基联苯胺溶液，使用时两者以1:1的比例混合；所述终止液为2mol/L的硫酸溶液。

5.根据权利要求2所述的猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括样品稀释液和20倍浓缩洗涤液；样品稀释液为含有5mg/ml酪蛋白的0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液；浓缩洗涤液为含有浓度为0.8％~1.2％的Tween-20的0.01M，pH值为7.4的磷酸盐缓冲液；所述试剂盒还包括阳性对照血清和阴性对照血清，所述阳性对照血清为猪伪狂犬病毒人工感染后采集的猪血清；所述阴性对照血清为无猪伪狂犬病毒病原体感染且无疫苗接种的猪血清。

6.权利要求1~5中任一项所述的猪伪狂犬病毒gE阻断ELISA抗体检测试剂盒在制备检测猪伪狂犬病毒感染或疫苗接种的待测样品的试剂中的应用；待测样品为感染野毒株或应用过非gE基因缺失病毒疫苗的猪只血清。