[发明专利]去除植物叶片中总叶绿素干扰H2

权利要求书

1.一种去除植物叶片中总叶绿素干扰H₂S含量测定的方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：

步骤S1，将植物叶片在pH＝7.0的研磨液中冰浴研磨得到匀浆液；

步骤S2，吸取匀浆液，然后加入等体积的提取液A，涡旋混匀后得到混合液，提取液A为丙酮和正己烷按照体积比1：1混合得到；

步骤S3，将步骤S2得到的混合液在4℃的条件下离心12-15min，离心速度为12000-14000r/min；

步骤S4，吸取上清液，然后加入等体积的提取液B，涡旋混匀后得到混合液，提取液B为三氯甲烷溶液；

步骤S5，将步骤S4得到的混合液在4℃的条件下离心3-4min，离心速度为10000-12000r/min；

步骤S6，吸取上层水相溶液，采用比色法测定上层水相溶液中的H₂S含量，即得植物叶片中H₂S含量。

2.根据权利要求1所述的一种去除植物叶片中总叶绿素干扰H₂S含量测定的方法，其特征在于，所述步骤S6，采用比色法测定上层水相溶液中的H₂S含量的方法具体为：准确吸取2-3mL水相溶液，向溶液中加入等体积的反应液C，25℃下反应2min，用紫外分光光度计在412nm波长处测定吸光度值，反应液C为0.0317g5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)溶于200毫升研磨液中得到；

式中，C：根据标准曲线拟合方程计算出所测样品吸光度值对应的H₂S浓度，μmol/L；V₁：步骤S1所用的研磨液体积，mL；V₂：步骤S2吸取的匀浆液体积，mL；V₃：步骤S6吸取的水相溶液体积，mL；F_w：步骤S1中植物叶片鲜重，g。

3.根据权利要求1所述的一种去除植物叶片中总叶绿素干扰H₂S含量测定的方法，其特征在于，所述步骤S1中，研磨液为100mM磷酸钾缓冲液，磷酸钾缓冲液中含10mM EDTA。

4.根据权利要求3所述的一种去除植物叶片中总叶绿素干扰H₂S含量测定的方法，其特征在于，所述研磨液的用量为：每0.15-0.20g植物叶片加入3.0-5.0mL研磨液。

5.根据权利要求1所述的一种去除植物叶片中总叶绿素干扰H₂S含量测定的方法，其特征在于，所述步骤S2中，涡旋混合的混合速度为2800-3000r/min，混合时间为15-18s。

6.根据权利要求1所述的一种去除植物叶片中总叶绿素干扰H₂S含量测定的方法，其特征在于，所述步骤S3中，离心时间为15min。

7.根据权利要求1所述的一种去除植物叶片中总叶绿素干扰H₂S含量测定的方法，其特征在于，所述步骤S4中，涡旋混合的混合速度为2800-3000r/min，混合时间为15-18s。

8.根据权利要求1所述的一种去除植物叶片中总叶绿素干扰H₂S含量测定的方法，其特征在于，所述步骤S5中，离心时间为3min。