[发明专利]一种治疗炎症性肠病的益生菌复合物

说明书

本发明提供了一种治疗炎症性肠病的益生菌复合物，它是用壳聚糖和海藻酸钠交替包裹大肠杆菌Nissle 1917(EcN)，再由钙离子交联处于最外层的海藻酸钠后得到；所述包裹的总层数为大于2的偶数。本发明能使得EcN抵抗胃酸、机械摩擦的同时，维持EcN的活性，发挥其在消化道内的抗炎功能。本发明克服了EcN易被胃内环境灭活的缺点，制备方法简单，具有十分优良的应用价值。

技术领域

本发明涉及益生菌药物领域，尤其涉及一种治疗炎症性肠病的益生菌复合物。

背景技术

大肠杆菌Nissle 1917(EcN)是来源于人体内肠道中的一种益生菌，被广泛用于预防传染性腹泻、炎症性肠疾病以及防止新生儿消化道内病原菌定殖；其使用方式主要是口服。

在肠道疾病治疗治疗中，口服的EcN由于容易经受胃酸侵蚀以及消化道挤压摩擦，其到达肠道病灶时的活性已被大大降低，发挥的治疗作用十分局限。

海藻酸钠和壳聚糖组成的保护性微胶囊目前已有报道，该微胶囊通常是由一层海藻酸钠包裹细菌后，交联钙离子，再在外侧包裹一层壳聚糖(E.coli Nissle microencapsμLation in alginate-chitosan nanoparticles and its effect on Campylobacterjejuni in vitro，Applied Microbiology and Biotechnology，2018)。然而，此种微胶囊包裹的EcN在pH值为2.5的环境中静置1h后，仅千分之一的菌能存活下来；若将其置于pH更低、且含有胃蛋白酶的胃酸中，能存活下来的菌就会更少，对EcN的利用率极低。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新的益生菌复合物。

本发明提供了一种治疗炎症性肠病的益生菌复合物，它是先后用壳聚糖和海藻酸钠交替包裹大肠杆菌Nissle 1917，再由钙离子交联处于最外层的海藻酸钠后得到；所述包裹的总层数为大于2的偶数。

如前述的益生菌复合物，所述包裹是将大肠杆菌悬液与壳聚糖或海藻酸钠溶液混合，经孵育、静置、富集菌体得到。

如前述的益生菌复合物，它是由如下方法制备得到：

(1)准备菌液：取16～24体积份的大肠杆菌Nissle 1917悬液，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(2)壳聚糖包裹：将菌液与0.4～0.6体积份的壳聚糖溶液混匀，得混合液；在摇床中孵育7min以上，静置3min以上，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(3)海藻酸钠包裹：将菌液与0.4～0.6体积份的海藻酸钠溶液混匀，得混合液；在摇床中孵育7min以上，静置3min以上，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(4)依次重复步骤(2)和(3)，重复次数为4次，得包裹菌体悬液；

(5)钙离子交联：将包裹菌体悬液与钙盐溶液混合，得混合液；静置3min以上，富集菌体，即得；

步骤(2)所述壳聚糖溶液浓度为0.5～1.5mg/ml；优选的，为1mg/ml；

步骤(3)所述的海藻酸钠溶液浓度为1.5～2.5mg/ml；优选的，为2mg/ml；

步骤(5)所述混合液中钙离子终浓度为28～X mmol/L，其中X mmol/L为所述钙盐饱和溶液中钙离子浓度；优选地，钙离子终浓度为28.8mmol/L；

以上各步骤的摇床孵育温度为25～39℃，摇床震荡频率为10～200rpm。

如前述的益生菌复合物，所述大肠杆菌Nissle 1917在包裹时处在对数生长期。