[发明专利]一种治疗炎症性肠病的益生菌复合物

权利要求书

1.一种治疗炎症性肠病的益生菌复合物，其特征在于，它是先后用壳聚糖和海藻酸钠交替包裹大肠杆菌Nissle 1917，再由钙离子交联处于最外层的海藻酸钠后得到；所述包裹的总层数为大于2的偶数。

2.如权利要求1所述的益生菌复合物，其特征在于，所述包裹是将大肠杆菌悬液与壳聚糖或海藻酸钠溶液混合，经孵育、静置、富集菌体得到。

3.如权利要求2所述的益生菌复合物，其特征在于，它是由如下方法制备得到：

(1)准备菌液：取16～24体积份的大肠杆菌Nissle 1917悬液，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(2)壳聚糖包裹：将菌液与0.4～0.6体积份的壳聚糖溶液混匀，得混合液；在摇床中孵育7min以上，静置3min以上，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(3)海藻酸钠包裹：将菌液与0.4～0.6体积份的海藻酸钠溶液混匀，得混合液；在摇床中孵育7min以上，静置3min以上，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(4)依次重复步骤(2)和(3)，得包裹4层的菌体悬液；

(5)钙离子交联：将包裹菌体悬液与钙盐溶液混合，得混合液；静置3min以上，富集菌体，即得；

步骤(2)所述壳聚糖溶液浓度为0.5～1.5mg/ml；步骤(3)所述的海藻酸钠溶液浓度为1.5～2.5mg/ml；步骤(5)所述混合液中钙离子终浓度为28～X mmol/L，其中X mmol/L为所述钙盐饱和溶液中钙离子浓度；以上各步骤的摇床孵育温度为25～39℃，摇床震荡频率为10～200rpm。

4.如权利要求3所述的益生菌复合物，其特征在于，步骤(2)所述壳聚糖溶液浓度为1mg/ml；

步骤(3)所述的海藻酸钠溶液浓度为2mg/ml；

步骤(5)所述混合液中钙离子终浓度为28～28.8mmol/L。

5.如权利要求1所述的益生菌复合物，其特征在于，所述大肠杆菌Nissle 1917在包裹时处在对数生长期。

6.一种治疗炎症性肠病的益生菌复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)准备菌液：取16～24体积份的大肠杆菌Nissle 1917悬液，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(2)壳聚糖包裹：将菌液与0.4～0.6体积份的壳聚糖溶液混匀，得混合液；在摇床中孵育7min以上，静置3min以上，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(3)海藻酸钠包裹：将菌液与0.4～0.6体积份的海藻酸钠溶液混匀，得混合液；在摇床中孵育7min以上，静置3min以上，富集菌体，3～6体积份的PBS重悬；

(4)依次重复步骤(2)和(3)，得包裹4层的菌体悬液；

(5)钙离子交联：将包裹菌体悬液与钙盐溶液混合，得混合液；静置3min以上，富集菌体，即得；

步骤(2)所述壳聚糖溶液浓度为0.5～1.5mg/ml；

步骤(3)所述的海藻酸钠溶液浓度为1.5～2.5mg/ml；

步骤(5)所述混合液中钙离子终浓度为28～X mmol/L，其中Xmmol/L为所述钙盐饱和溶液中钙离子浓度；

以上各步骤的摇床孵育温度为25～39℃，摇床震荡频率为10～200rpm。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，

步骤(2)所述壳聚糖溶液浓度为1mg/ml；

步骤(3)所述的海藻酸钠溶液浓度为2mg/ml；

步骤(5)所述所述钙盐是氯化钙，所述混合液中钙离子终浓度为28～28.8mmol/L。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)的体积份数为20；

和/或，步骤(1)、(2)或(3)所述的PBS体积份数是4；

和/或，步骤(2)的壳聚糖溶液的体积份数是0.5；

和/或，步骤(3)的海藻酸钠溶液的体积份数是0.5。