[发明专利]肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法

权利要求书

1.一种肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：

R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的缓冲液；

R2：含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；

R3：含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；其中，R1中链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.02％～1％；链霉亲和素包被的磁微粒的粒径是0.05～3μm，浓度为10mg/ml；

R2中肌红蛋白单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:1-1:20；化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为≥0.2μg/ml。

R3中肌红蛋白单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:1-1:20；偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为≥0.7μg/ml。

2.根据权利要求1所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：

R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的缓冲液；

R2：含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；

R3：含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；其中，R1中链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.072％；链霉亲和素包被的磁微粒的粒径是3μm；

R2中肌红蛋白单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:3；化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为0.4μg/ml。

R3中肌红蛋白单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:5；偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为1.4μg/ml。

3.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R1的制备方法为：取磁微粒，用20mM PB缓冲液清洗3次，然后稀释至10mg/ml，按照磁微粒与链霉亲和素所述的质量比添加链霉亲和素，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用20mM PB缓冲液清洗3次，加入封闭液，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用20mM PB缓冲液清洗3次，用20mM PB缓冲液稀释至10mg/ml，2-8℃保存备用，得到含有链霉亲和素包被的磁微粒的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。

4.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R2的制备方法为：取肌红蛋白单克隆抗体，用20mM PB缓冲液置换肌红蛋白单克隆抗体保存液，用20mM PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照抗体与化学发光标记物的摩尔比添加化学发光标记物，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，37℃孵育2-4h，最后对蛋白进行纯化，得到含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。

5.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R3的制备方法为：取肌红蛋白单克隆抗体，用20mM PB缓冲液置换肌红蛋白单克隆抗体保存液，用20mM PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照抗体与偶联标记物的摩尔比进行添加偶联标记物，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，37℃孵育2-4h，最后对蛋白进行纯化，得到含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。

6.根据权利要求1-5任一项所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。

7.根据权利要求1-5任一项所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物为生物素。