[发明专利]基于一测多评法鉴别制何首乌的方法

权利要求书

1.基于一测多评法鉴别制何首乌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)计算相对校正因子：精密量取大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄苷，分别制备得到四种对照品溶液，然后采用外标法，得到四个对照品的标准曲线，以大黄素为内标，分别计算出大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄苷的相对校正因子；

2)计算各成分含量：取待检测的制何首乌粉末制备供试品溶液，以大黄素作为对照品制备对照品溶液，采用高效液相色谱法进行梯度洗脱，获得色谱图，以大黄素对照品的峰面积为对照，然后按照步骤1)计算得到的对应成分的相对校正因子，计算得到大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄苷的含量；

3)计算F值判断待检测的制何首乌是否炮制完全，F值按式(1)计算：

F＝(大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄苷含量+大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄苷含量)/(大黄素含量+大黄素甲醚含量) (1)

则有：

当F≤0.6时，判断待检测的制何首乌为炮制完全的制何首乌；

当F≥1.0，判断待检测的制何首乌为何首乌生品；

当0.6＜F＜1，判断待检测的制何首乌为炮制不完全的制何首乌。

2.根据权利要求1所述的基于一测多评法鉴别制何首乌的方法，其特征在于，F值的变化与炮制加工时间相关，何首乌生品炮制时间≥8h，F值≤0.6。

3.根据权利要求1所述的基于一测多评法鉴别制何首乌的方法，其特征在于，高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，检测波长为254nm。

4.根据权利要求3所述的基于一测多评法鉴别制何首乌的方法，其特征在于，采用高效液相色谱梯度洗脱时，流动相A与流动相B的变化比例如下：

0～8min，流动相A：18％～30％、流动相B：70％～82％；

8～24min，流动相A：30％～36％、流动相B：64％～70％；

24～28min，流动相A：36％～80％、流动相B：20％～64％；

28～39min，流动相A：80％～95％、流动相B：5％～20％；

39～40min，流动相A：18％～95％、流动相B：5％～82％；

40～45min，流动相A：18％、流动相B：82％。

5.根据权利要求1所述的基于一测多评法鉴别制何首乌的方法，其特征在于，步骤1)所述相对校正因子计算方法为：以大黄素作为内标物，按下式(2)计算大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的相对校正因子f_km；

其中，A_k为大黄素峰面积；W_k为大黄素浓度；A_m为其他待测组分的峰面积；W_m为其他待测组份的浓度；k为大黄素，m为其他待测组分，f_k为大黄素的校正因子，f_m为其他待测组分的校正因子。

6.根据权利要求5所述的基于一测多评法鉴别制何首乌的方法，其特征在于，大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄苷的相对保留时间及相对校正因子如下：

7.根据权利要求1所述的基于一测多评法鉴别制何首乌的方法，其特征在于，步骤2)中，供试品溶液是向1g待检测的制何首乌粉末加入50mL甲醇，加热回流处理1h，冷却制得。

8.根据权利要求1所述的基于一测多评法鉴别制何首乌的方法，其特征在于，步骤2)中，对照品溶液是将大黄素溶于甲醇中制成浓度为30μg/ml的溶液。