[发明专利]用于测定去纤维蛋白多核苷酸的生物活性的基于优球蛋白的方法

说明书

公开了用于测定去纤维蛋白多核苷酸的生物活性的方法，其包括以下步骤：a)使哺乳动物的优球蛋白及对血纤维蛋白溶酶具特异性的底物接触去纤维蛋白多核苷酸，该底物通过与该血纤维蛋白溶酶作用而提供可测量的产物；以及b)测量于连续时间中所产生的产物的量，从而测定该去纤维蛋白多核苷酸的生物活性。亦公开了液体去纤维蛋白多核苷酸制剂，其优选为水溶液，具有定义的生物活性，且特别地具有去纤维蛋白多核苷酸的活性为25至35IU/mg，优选27.5至32.5IU/mg，以及更优选28至32IU/mg。

本申请是中国专利申请201280074120.5的分案申请，原申请的申请日是2012年6月22日，发明名称是“用于测定去纤维蛋白多核苷酸的生物活性的基于优球蛋白的方法”。

本发明是关于一种用于测定去纤维蛋白多核苷酸的生物活性的方法，以及更特别地是关于一种间接酶促方法，用于测定去纤维蛋白多核苷酸的生物活性。

发明的技术领域

去纤维蛋白多核苷酸(Merck Index,1996,no.2915)是天然起源的物质，其是从动物器官提取而得，且其是由低分子量的聚脱氧核糖核苷酸钠盐组成。去纤维蛋白多核苷酸已成为许多医药研究的主题，所述研究已推测其可作为抗凝血剂用于治疗(美国专利号3,829,567)。

此外，去纤维蛋白多核苷酸亦已被成功用于治疗外周动脉血管疾病、急性肾功能不全(美国专利号4,694,134)或急性心肌缺血(美国专利号第4,693,995)。

目前，去纤维蛋白多核苷酸正用于进行静脉阻塞疾病(VOD)的治疗与预防的临床试验。

如同其他提取而得的生物物质，去纤维蛋白多核苷酸也受制于组成的有限变化性，这对于天然生物聚合物是典型的。此状况的经典例子是肝素，已知其在链长、分子量、组成、硫酸盐化的程度等方面随批次的变化性。此结果是相同重量的去纤维蛋白多核苷酸可能实际上从比生物活性的观点而言是非等同的。

由于其固有的生物聚合物本质，提取、分离与纯化的过程无法本身确保产物的绝对的再现性。

然而，如果控制良好，可能降低此变化性。为达此目的，已有研究得到用于通过从器官提取分离去纤维蛋白多核苷酸的标准化的工业过程，例如美国专利号4,985,552所描述的。

上述过程所得到的产物通过测定一些特定的物理化学参数而表征，例如，电泳移动率、消光系数、旋光力以及质量平均相对分子质量。然而，这些参数基本上取决于去纤维蛋白多核苷酸的结构，并且无法提供其生物活性的信息。

目前如我们所知，已报导用于评估去纤维蛋白多核苷酸的生物活性的方法仅有纤维蛋白平板测试法与优球蛋白水解时间凝血弹性图式记录(thromboelastographicrecording)(Prino G.、Mantovani M.、Niada R.、Coccheri S.、Butti A.、Indaginipreliminari sull′attivitàfibrinolitica、nell′animale e nell′uomo与di una nuovasostanza发表的diversi organi animali,Simposio Internazionale:La ricercascientifica nell’industria farmaceutica,意大利，罗马，1975年10月2-4日—IlFarmaco,Ed.Prat.)(1969),24,552-561)，以及美国专利号7,338,777公开的以血纤维蛋白溶酶为基础的方法，上述皆通过引用并入本案。

然而，在上述方法中，优球蛋白水解时间凝血弹性图式记录的特征是相当大的实验复杂性、不令人满意的再现性与精准性，以及，在凝血弹性图式记录的一些特定例子中，反应线性受限于非常严格的浓度范围。