[发明专利]用于测定去纤维蛋白多核苷酸的生物活性的基于优球蛋白的方法

权利要求书

1.用于测定去纤维蛋白多核苷酸的生物活性的方法，所述方法包括以下步骤：

a)使哺乳动物的优球蛋白及血纤维蛋白溶酶特异性的底物接触去纤维蛋白多核苷酸，所述底物通过与源自优球蛋白中所含的血纤维蛋白溶酶原水解的血纤维蛋白溶酶反应提供可测量的产物；以及

b)测量在连续时间中所形成的产物的量，从而以测定去纤维蛋白多核苷酸的生物活性，

其中血纤维蛋白溶酶特异性的底物为式A₁-A₂-A₃-X的化合物，其中A₁与A₂为非极性氨基酸，A₃是赖氨酸或精氨酸，以及X是可测量的产物；

且所述血纤维蛋白溶酶特异性的底物是H-D-缬氨酰-L-亮氨酰-L-赖氨酸-p-硝基苯胺。

2.根据权利要求1的方法，其中优球蛋白是哺乳动物优球蛋白。

3.根据权利要求2的方法，其中优球蛋白是人、兔或牛优球蛋白。

4.根据权利要求1的方法，其中与血纤维蛋白溶酶特异性的底物反应的血纤维蛋白溶酶由包含于优球蛋白中的血纤维蛋白溶酶原所释放。

5.根据权利要求1的方法，其中血纤维蛋白溶酶特异性的底物是发色底物。

6.根据权利要求1的方法，其中通过分光光度法或荧光测定法测量可测量的产物X。

7.根据权利要求2的方法，其中用缓冲液将哺乳动物优球蛋白重构为与来源血浆相同的体积，或高至1:10稀释，且发色底物具有从2.5至3.5 mM的浓度。

8.根据权利要求7的方法，其中发色底物具有3 mM的浓度。

9.根据权利要求1的方法，其中所述方法在反应基质中进行，所述反应基质是缓冲至pH7至8的水溶液。

10.根据权利要求9的方法，其中所述反应基质是缓冲至pH 7.4的水溶液。

11.根据权利要求1的方法，其中温度维持在从35至39°C。

12.根据权利要求11的方法，其中温度维持在37°C。

13.根据权利要求1的方法，其中血纤维蛋白溶酶特异性的底物的浓度为从0.3至4 mM。

14.根据权利要求13的方法，其中血纤维蛋白溶酶特异性的底物的浓度为3 mM。

15.根据权利要求1的方法，所述方法包括步骤：c)在标准样品与测试样品二者的酶促反应过程中，测定可测量的产物的释放速率；d)数学上地及/或图形上地关联释放速率与所对应的去纤维蛋白多核苷酸浓度，以得到去纤维蛋白多核苷酸的测试样品的生物活性。

16.根据权利要求1的方法，其中去纤维蛋白多核苷酸是液体去纤维蛋白多核苷酸制剂，其具有的去纤维蛋白多核苷酸的生物活性为25至35 IU/mg。

17.根据权利要求16的方法，其中去纤维蛋白多核苷酸的生物活性为27.5至32.5 IU/mg。

18.根据权利要求17的方法，其中去纤维蛋白多核苷酸的生物活性为28至32 IU/mg。