[发明专利]一种混合染料标记荧光微球的制备方法

权利要求书

1.一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备羧基化多孔聚苯乙烯微球，备用；

S2、选择至少两种不同的脂溶性荧光染料制备混合染料，备用；

S3、将所述步骤S2在中得到的混合染料包埋在荧光微球内部，得到所述荧光微球。

2.如权利要求1所述的一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，所述S1中制备羧基化多孔聚苯乙烯微球时，包括以下步骤：

S11、将1-5重量份的空白PS微球加入到200-1000重量份的0.25Wt.％SDS水溶液中，超声分散后，得到A分散液，备用；

S12、将1-5重量份的环己烷加入到200-1000重量份的0.25Wt.％SDS水溶液中，超声分散后，得到B分散液，备用；

S13、将所述步骤S12中得到的B分散液逐滴加入到所述步骤S11中得到的A分散液中，加入过程中保持搅拌，然后置于10-50℃的条件下溶胀4-12h，依次加入1-5重量份的BPO、100-500重量份的苯乙烯、100-500重量份的二甲基丙烯酸乙二醇酯、100-500重量份的甲苯、5-25重量份的丙烯酸和800重量份的0.25Wt.％的SDS水溶液，然后置于10-50℃的条件下搅拌6-12h后，再依次加入20-100重量份PVP-K30和500重量份的超纯水，置于80℃的条件下反应6-18h后，使用超纯水和95vol％的乙醇各重复洗涤三次后，使用10vol％的乙醇洗涤并重力筛选得到尺寸均一的羧基化多孔聚苯乙烯微球。

3.如权利要求2所述的一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，所述S11中将空白PS微球加入到SDS水溶液中后，置于100-500W的条件下超声分散20-40min。

4.如权利要求2所述的一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，所述S12中将环己烷加入到SDS水溶液中后，置于100-500W的条件下超声分散20-40min。

5.如权利要求1-4中任一项所述的一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中制备混合染料包括以下步骤：

S21、选择至少两种脂溶性荧光染料，并将其分别溶解于DMSO中配置成浓度为0.001-1mg/mL的溶液，得到不同的染料溶液，备用；

S22、将所述步骤S21中得到的不同的染料溶液按照任意比混合均匀，即制得所述混合染料。

6.如权利要求5所述的一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中采用溶胀吸附的方法将混合染料包埋在荧光微球内部，以得到所述荧光微球。

7.如权利要求6所述的一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中采用溶胀吸附的方法将脂溶性荧光染料包埋在荧光微球内部，包括以下步骤：

S31、将四氢呋喃和水按照1:5-9的体积比混合，得到四氢呋喃水溶液，备用；

S32、将所述步骤S1中得到的羧基化多孔聚苯乙烯微球和所述步骤S31得到的四氢呋喃水溶液按照1mg:0.1-10mL的质量体积比混合均匀，超声分散后，加入所述步骤S2中得到的混合染料，其中混合染料和所述步骤S1中得到的羧基化多孔聚苯乙烯微球的质量体积比为1mg:10^-6-10^-2mL，然后溶胀吸附2-24h后，真空条件下除去有机溶剂后，备用；

S33、将乙醇和环己烷按照体积比9-99:1混合，得到乙醇/环己烷混合溶液，然后使用得到的乙醇/环己烷混合溶液对所述步骤S32中除去有机溶剂后的微球进行多次洗涤后，得到所述荧光微球。

8.如权利要求7所述的一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S32中加入混合染料，置于10-80℃的条件下进行溶胀吸附。

9.如权利要求7所述的一种混合染料标记荧光微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S32中置于真空度为0.05-0.1MPa、温度为10-80℃的条件下真空干燥2-24h，以除去有机溶剂。