[发明专利]一种金霉素残留分析的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开一种金霉素残留分析的化学发光检测试剂盒，包括金霉素标准溶液、洗涤液、稀释缓冲液、偶联有金霉素抗体的磁微粒、镧族金属元素Eu标记的鼠抗金霉素单克隆抗体及兔抗金霉素多克隆抗体，以镧族金属元素Eu络合生物素形成的复合物标记的鼠抗金霉素单克隆抗体，基于抗原抗体反应结合化学发光，作为信号源，通过检测光的强度来精确测定金霉素含量，精度高，检测准确快捷。

技术领域

本发明属于对动物源食品中金霉素进行残留分析的酶联免疫检测技术领域。具体地说，涉及一种金霉素残留分析的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

金霉素是四环素类药物主要成员之一，为多环并四苯羧基酰胺母核的衍生物，具有抗菌作用，其同类药物主要有四环素、土霉素和去甲基金霉素、强力霉素等。

由于金霉素对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体、原虫等具有抑制作用，因此其应用极为广泛。但是，不合理用药可导致金霉素在动物可食性组织中蓄积残留，继而危害人体健康。鉴于此，对肉、蛋、奶等动物源食品中金霉素药物残留量的监测势在必行。

现有的检测动物源食品中兽药残留鉴别和判定方法主要包括微生物方法、高效液相色谱法和酶联免疫分析法等。

应用微生物方法的主要缺点是：检测时间长(2～3天)，缺乏专一性，甚至无法对某一类药物定性(Nikolaos A.Botsoglou，Dimitrios J.Fletouris.Drug residues infoods pharmacology，food safety and analysis[M].New York，2001)。

应用高效液相色谱法(HPLC)法的主要缺点是：检测时间较长、灵敏度较低、设备昂贵、难以在基层推广应用。

目前，国内外专门针对动物源食品中金霉素残留量分析的酶联免疫检测试剂盒及其检测方法尚未见报道和推广应用。

酶联免疫分析方法所用的核心试剂主要是生物试剂，例如抗体、酶标记抗体，检测原理是生物化学反应，其检测结果极易受到各种因素的干扰，因此，排除干扰是关键。

现有的检测某种兽药残留的ELISA方法，由于所制备的抗体的特异性存在差异，在处理组织样品时，都要求过柱净化以排除干扰，这样势必增加操作步骤，加大检测成本，延长检测时间(一般延长2小时左右)，不利于提高工作效率。

如申请号为CN200510086347.3的专利公开了一种适用于金霉素残留分析的酶联免疫检测试剂盒及其应用。包括盒体，设在盒体内的酶标板和试剂，其中的试剂包含洗涤液、样品稀释液、辣根过氧化酶标记羊抗兔抗体、底物液、显色液和终止液。本发明的核心在于有包被液包被的能与金霉素抗体特异性反应的包被抗原，金霉素标准溶液和金霉素抗体，该抗体是由人工免疫原免疫家兔得到的血清。包被抗原为金霉素乙酸和卵清白蛋白的复合物。人工免疫原是由金霉素乙酸与牛血清白蛋白的复合物。这种试剂盒只能进行定性检测，检测精度低，对于现在的兽药残留标准来说，很难满足其需要的检测标准。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种金霉素残留分析的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种金霉素残留分析的化学发光检测试剂盒，包括金霉素标准溶液、洗涤液、稀释缓冲液、偶联有金霉素抗体的磁微粒、镧族金属元素Eu标记的鼠抗金霉素单克隆抗体及兔抗金霉素多克隆抗体。

进一步的，所述磁微粒可直接与金霉素抗体偶联。

进一步的，所述洗涤液由Tris和HCL构成弱碱性缓冲液，即Tris-HCL，pH 7.2-7.6，浓度为0.030-0.065M，含有脂肪醇聚氧乙烯醚。

本发明还介绍了上述试剂盒的制备方法，具体包括如下步骤：