[发明专利]一种酶联核酸适配体的鸡毒支原体抗体检测方法及其专用试剂盒

说明书

本发明公开了一种酶联核酸适配体的鸡毒支原体抗体检测方法及其专用试剂盒。本发明提供了一种核酸适配体，如序列表的序列3所示，同时提供了应用此核酸适配体进行酶联核酸适配体的鸡毒支原体抗体检测的方法。本发明提供的酶联核酸适配体的鸡毒支原体抗体检测方法具有较好的敏感性和特异性，适用于田间大量样品的快速检测。本发明可有效检测MG感染后抗体的产生，为鉴定MG感染提供了可靠的检测方法，也为MG疫情防控提供科学指导。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种酶联核酸适配体的鸡毒支原体抗体检测方法及其专用试剂盒。

背景技术

鸡毒支原体(MG)是鸡慢性呼吸道病(CRD)的病原，可引起鸡呼吸道、气囊和眶下窦损伤，蛋鸡产蛋率下降，肉鸡品质下降，废弃率增高，是养禽业危害严重的传染病之一。MG能经卵垂直传播，从而导致孵化率、受精率降低，雏鸡死亡率升高和生长发育障碍，并使种鸡后代成为MG感染阳性鸡群，这是该病非常普遍的重要原因，同时对该病原的控制和净化带来极大困难，因此检测种蛋内是否存在MG，对切断经卵垂直传播和使鸡群得到净化，提高后代鸡群的生产效益具有重要意义。目前，我国开展MG血清学监测通常使用美国IDEXX等公司的检测试剂盒，检测成本高、推广范围窄。因此研究开发具有自主知识产权的MG检测试剂盒，降低MG检测成本，扩大鸡群检测范围，对我国防控本病有重要的实际意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种酶联核酸适配体的鸡毒支原体抗体检测方法及其专用试剂盒。

本发明首先提供了一种核酸适配体，为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a2)与(a1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且能特异性结合PVPA蛋白的单链DNA分子。

所述核酸适配体采用生物素标记。

所述核酸适配体在5’端进行生物素标记。

本发明还保护所述核酸适配体的应用，为如下(b1)-(b4)中的至少一种：

(b1)特异性结合PVPA蛋白；

(b2)制备特异性结合PVPA蛋白的产品；

(b3)检测PVPA蛋白；

(b4)制备检测PVPA蛋白的产品。

本发明还保护所述核酸适配体的应用，为如下(c1)-(c4)中的至少一种：

(c1)检测血清中鸡毒支原体抗体含量；

(c2)制备用于检测血清中鸡毒支原体抗体含量的试剂盒；

(c3)判断待测动物是否感染了鸡毒支原体；

(c4)制备用于待测动物是否感染了鸡毒支原体的试剂盒。

本发明还保护一种酶联免疫试剂盒，含有经过生物素标记的所述核酸适配体；所述试剂盒的用途为如下(d1)和/或(d2)：

(d1)检测血清中鸡毒支原体抗体含量；

(d2)判断待测动物是否感染了鸡毒支原体。

所述酶联免疫试剂盒中的核酸适配体在5’端进行生物素标记。

所述试剂盒中还含有包被抗原；所述包被抗原为PVPA蛋白。

所述试剂盒中还含有如下中的至少一种：微孔板、标准阴性对照血清、标准阳性血清、血清稀释液、封闭液、核酸适配体稀释液、洗涤液、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素、显色底物和终止液。

所述血清稀释液为含体积百分含量5％猪血清的0.01M PBS溶液。