[发明专利]一种酶联核酸适配体的鸡毒支原体抗体检测方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.一种核酸适配体，为序列表的序列3所示的单链DNA分子。

2.权利要求1所述的核酸适配体的应用，为如下（b1）-（b4）中的至少一种：

（b1）特异性结合PVPA蛋白；所述应用为非疾病诊断的应用；

（b2）制备特异性结合PVPA蛋白的产品；

（b3）检测PVPA蛋白；所述应用为非疾病诊断的应用；

（b4）制备检测PVPA蛋白的产品。

3.权利要求1所述的核酸适配体的应用，为如下（c1）-（c3）中的至少一种：

（c1）检测血清中鸡毒支原体抗体含量；所述应用为非疾病诊断的应用；

（c2）制备用于检测血清中鸡毒支原体抗体含量的试剂盒；

（c3）制备用于待测动物是否感染了鸡毒支原体的试剂盒。

4.一种酶联免疫试剂盒，含有经过生物素标记的权利要求1所述的核酸适配体；所述试剂盒的用途为如下（d1）和/或（d2）：

（d1）检测血清中鸡毒支原体抗体含量；

（d2）判断待测动物是否感染了鸡毒支原体。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有包被抗原；所述包被抗原为PVPA蛋白。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述PVPA蛋白的氨基酸序列如序列表的序列2所示。

7.如权利要求4至6任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有如下中的至少一种：微孔板、标准阴性对照血清、标准阳性血清、血清稀释液、封闭液、核酸适配体稀释液、洗涤液、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素、显色底物和终止液。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：

所述血清稀释液为含体积百分含量5%猪血清的0.01M PBS溶液；

所述封闭液为含体积百分含量5%猪血清的0.01M PBS溶液；

所述核酸适配体稀释液为0.01M PBS；

所述洗涤液为含体积百分含量0.05％吐温-20的磷酸盐缓冲液；

所述显色底物为TMB；

所述终止液为2mol H₂SO₄水溶液。

9.一种检测血清中鸡毒支原体抗体含量的方法，包括如下步骤：取待测血清，采用权利要求8所述的试剂盒进行阻断ELAA检测，根据检测结果计算抗体含量；

所述阻断ELAA检测包括如下步骤：PVPA蛋白包被、封闭、加入血清样品、核酸适配体孵育、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素孵育、显色、终止和读值；

所述PVPA蛋白的使用浓度为1μg/mL；

所述封闭的时间为1h；

所述血清样本在使用时进行1:2倍稀释；

所述核酸适配体的使用浓度为100nM；

所述辣根过氧化物酶标记链霉亲和素的稀释比为1:32000；

所述方法为非疾病诊断的方法。