[发明专利]一种中华绒鳌蟹饲喂方式的鉴别方法

权利要求书

1.一种中华绒鳌蟹饲喂方式的鉴别方法，其特征是步骤如下：

（1）对照体系的建立：从中华绒鳌蟹养殖池塘，采集冰鲜鱼饲喂的中华绒鳌蟹成蟹10-100只，同时采集配合饲料饲喂的中华绒螯蟹成蟹10-100只；样品采集完成后，建立对照体系；

（2）样品建立：从市场随机采集正在出售的中华绒鳌蟹，作为判定对象，采用步骤（1）所述方式获取数据；

（3）绘图：将步骤（2）获取的判定对象数据依据非度量多维尺度法绘图；数据点与步骤（1）获得的冰鲜鱼饲喂数据相聚成簇，判定采集的中华绒螯蟹是冰鲜鱼饲喂的；如果数据点与步骤（1）获得的配合饲料饲喂数据相聚成簇，则判定采集的中华绒螯蟹是配合饲料饲喂的；

所述步骤（1）所述样品采集方式具体为：

①对中华绒鳌蟹的蟹膏部分进行均浆后萃取制样；

②蟹膏均浆后采用体积比为1:1的乙醚-石油醚混合溶液进行萃取，减压旋转蒸干，随后采用1-5mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液和质量浓度为10%-20%的三氟化硼-甲醇溶液再次回流提取，得到样品；

③将制得的样品使用气相色谱仪进行37种脂肪酸的色谱分析；37种脂肪酸分别是，C4:0、C6:0、C8:0、C10:0、C11:0、C12:0、C13:0、C14:0、C14:1、C15:0、C15:1、C16:0、C16:1、C17:0、C17:1、C18:0、C18:1n9t、C18:1n9c、C18:2n6t、C18:2n6c、C20:0、C18:3n6、C20:1、C18:3n3、C21:0、C20:2、C22:0、C20:3n6、C22:1n9、C20:3n3、C20:4n6、C23:0、C22:2、C24:0、C20:5n3、C24:1和C22:6n3；

④最后对所获得的数据利用非度量多维尺度法绘图；其中蓝色圆点1是冰鲜鱼饲喂的中华绒鳌蟹，红色圆点2是配合饲料饲喂的中华绒螯蟹；

所述蟹膏均浆后具体过程如下：称取4g于250mL带塞烧瓶中，依次加入100-300mg焦性没食子酸、2-5mL乙醇、4-20mL超纯水，混匀；加入10-30mL浓盐酸，70℃水浴40-60 min；待烧瓶冷却至室温，使用比例为1:1的乙醚-石油醚混合溶液进行萃取，重复两次；将溶液于40℃减压旋转蒸干；加入8mL 1-5 mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液，75℃冷凝回流30-60min后加入7mL 10%-20%三氟化硼-甲醇溶液，继续回流2-20min；少量水冲洗，冷却至室温；依次加入10-30mL正己烷、10-30mL饱和食盐水，震荡，静置，取上清液，去水，-20℃储存；

色谱条件是，色谱柱为CD-2560， 100m×0.25mm×0.20µm；

载气为高纯氮气；流量为0.5-1mL/min；柱温升温程序：初始温度140℃，保持5-8min，以4℃/min升至230℃保持30-60min。