[发明专利]一种中继式纳米稀土上转换发光材料及中继式蛋白酶活性检测方法

权利要求书

1.一种中继式纳米稀土上转换发光材料，其特征在于，包括纳米稀土上转换发光材料和能吸收纳米稀土上转换发光材料所发光能量的染料分子，所述染料分子为一种中继层染料分子，其在1-10nm内连接在纳米稀土上转换发光材料的表面；所述的纳米稀土上转换发光材料在连接所述染料分子前，先进行氨基双磷酸小分子配体修饰，变成带有氨基的纳米稀土上转换发光材料；所述的纳米稀土上转换发光材料表面还连接有另一种染料分子标记的酶切底物多肽，该染料分子能吸收中继层染料分子的发射光；所述纳米稀土上转换材料为NaLnF₄（Yb，Er）、NaLnF₄（Yb，Tm）、NaLnF₄（Yb，Ho）中的至少一种，其中Ln为Y、Gd、La、Lu中的任一种；所述的中继式染料分子为能吸收纳米稀土上转换发光材料发射光的NHS-Cy3或FITC染料中的一种，其中所述的中继层染料分子为Cy3时，染料分子所标记的酶切底物多肽为QSY7标记的酶切底物多肽，或者中继层染料分子为FITC时，染料分子所标记的酶切底物多肽为BHQ1标记的酶切底物多肽。

2.根据权利要求1所述的中继式纳米稀土上转换发光材料，其特征在于，所述的氨基双磷酸小分子配体为帕米膦酸，奈立膦酸，阿仑膦酸。

3.根据权利要求1或2所述的中继式纳米稀土上转换发光材料，其特征在于，所述NHS-Cy3能吸收NaLnF₄（Yb，Er）的发射光。

4.根据权利要求1或2所述的中继式纳米稀土上转换发光材料，其特征在于，所述FITC能吸收NaLnF₄（Yb，Tm）的发射光。

5.一种基于纳米稀土上转换发光材料的中继式蛋白酶活性检测方法，其特征在于，具体步骤为：

对纳米稀土上转换发光材料UCNP进行氨基双磷酸小分子配体修饰；

将修饰后的纳米稀土上转换发光材料UCNP@NH₂作为核心，表面连接两种分子，一种分子为直接修饰到核心表面的可以直接吸收核心所发生的光的染料分子，称之为中继层染料分子；另一种分子为末端修饰可以吸收中继层染料分子能量分子多肽底物；将得到的物质加入能够剪切多肽底物的酶液；

在近红外激发下，检测中继层染料的荧光强度。

6.根据权利要求5所述的蛋白酶活性检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1) 将氨基功能化的上转换稀土纳米晶UCNP@NH₂用DMSO分散于离心管；

(2)按与氨基功能化的上转换稀土纳米晶1：（300-1000）的摩尔比加入中继层染料储备液，以及按与中继层染料1：(5-10)的摩比加入NHS-（PEG）2-NHS储备液，搅拌，避光反应；

(3)将上述溶液离心，用DMSO洗至上清液无色，向离心产物中加DMSO分散，得到染料功能化稀土纳米晶溶液；

(4)将染料功能化稀土纳米晶溶液中与染料标记的多肽溶液按1：(300-1000)的摩尔比混合，搅拌，避光反应；

(5)用酶切缓冲液清洗、离心，分散在buffer溶液中，得到多肽功能化稀土纳米晶溶液；

(6)向多肽功能化稀土纳米晶溶液中分别加入不同浓度的蛋白酶储备液；

(7) 离心，去除上清液后再分散，近红外激发下检测中继层染料的发光强度。