[发明专利]一种碱性磷酸酶活性检测试剂盒及检测方法在审
申请号: | 201910205397.0 | 申请日: | 2019-03-18 |
公开(公告)号: | CN111721756A | 公开(公告)日: | 2020-09-29 |
发明(设计)人: | 王加启;郑楠;张养东;王峰恩;文芳;李松励;赵圣国;李慧颖 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
主分类号: | G01N21/78 | 分类号: | G01N21/78;C12Q1/42 |
代理公司: | 北京知元同创知识产权代理事务所(普通合伙) 11535 | 代理人: | 刘元霞;邢振兰 |
地址: | 100193 北京市海淀区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 碱性磷酸酶 活性 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种碱性磷酸酶活性检测试剂盒,其特征在于,包括标准比色卡和显色试剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述显色试剂包含酚酞磷酸钠或者磷酸苯二钠中的一种,例如选自包含酚酞磷酸钠或磷酸苯二钠的显色试剂。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述标准比色卡包含至少两个颜色深浅不同的色块,例如包含5-10个色块;
优选地,所述标准比色卡各个色块对应于不同的碱性磷酸酶标准活性浓度或生乳比例。
优选地,所述标准比色卡采用如下方法制作:采用不含ALP或ALP已完全失活的液态乳,加入不同活性浓度的ALP标准品或者不同比例的生乳,形成含有不同活性浓度的ALP或生乳比例标准品乳样,向该系列乳样中加入显色试剂,进行显色反应,得到不同浓度ALP或生乳比例显示的色彩,将其显示的色彩定为比色卡的标准色,标注对应颜色下的ALP活性浓度或生乳比例即得标准比色卡;
优选地,所述ALP标准品的浓度或加入生乳的比例以梯度递增;例如,所述梯度递增是以倍数递增。
4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述包含酚酞磷酸钠的显色试剂包括氨水、氯化铵、酚酞二磷酸四钠和水;
优选地,所述包含酚酞磷酸钠的显色试剂为所述酚酞二磷酸四钠溶于NH3-NH4Cl缓冲溶液的酚酞磷酸钠溶液,其中所述NH3-NH4Cl缓冲溶液由所述氨水、氯化铵和水配制而成;
优选地,所述包含磷酸苯二钠的显色试剂包括2,6-二溴苯醌氯亚胺、Na2CO3、磷酸苯二钠、乙醇、硼酸盐缓冲液和水;
优选地,所述包含磷酸苯二钠的显色试剂中,由所述磷酸苯二钠、硼酸盐缓冲液配制磷酸苯二钠-硼酸盐缓冲基质,所述2,6-二溴苯醌氯亚胺和乙醇配制成Gibb酚试剂,所述Na2CO3和水配制为Na2CO3溶液;
优选地,所述包含磷酸苯二钠的显色试剂进一步包括正丁醇;
优选地,所述试剂盒包括至少一个棕色试剂瓶。
5.如权利要求1-4任一项所述试剂盒在乳品碱性磷酸酶活性检测中的应用,所述检测为半定量检测。
6.一种快速半定量检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,包括以下步骤将显色试剂与待测样品接触,进行显色反应,将显色结果与指示ALP活性浓度或生乳比例的标准比色卡对比,确定样品中ALP活性浓度或生乳比例的范围。
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