[发明专利]一种重组蛋白的纯化方法

说明书

本发明属于蛋白纯化技术领域，具体涉及一种重组蛋白的纯化方法，包括将重组蛋白的发酵液依次经过Blue Bestarose 6 Fast Flow层析、Phenyl Bestarose High Performance‑硫酸铵疏水层析、Bestarose Diamond MD层析、Phenyl Bestarose High Performance‑氯化钠疏水层析和Bestarose DEAE Fast Flow层析。本发明的重组蛋白的纯化方法，提供了具有连贯性好，操作性强且杂质去除和目的蛋白回收率好的一套完整纯化工艺方法；而且，纯化获得的原液经质量检定，检定结果均符合制造与检定规程的要求。

技术领域

本发明属于蛋白纯化技术领域，具体涉及一种重组蛋白的纯化方法。

背景技术

人血清白蛋白(HSA)是以具有585个氨基酸的蛋白质，它是血清中渗透压的一个重要组成部分，而且起内源和外源配体的载体的作用。白蛋白作为一种载体分子的作用及其惰性性质是它作为一种稳定剂和多肽的运载蛋白的必需特征。白蛋白作为融合蛋白的组份，已经广泛用于稳定其它蛋白质。HSA通过遗传操作的方法，使得编码HSA的DNA或其片段与编码所说的多肽的DNA连接。然后，用该融合核苷酸转化或转染合适的宿主，从而使得合适的质粒表达融合多肽。

重组蛋白是利用重组DNA或重组RNA技术而获得的蛋白质，即人工设计的蛋白分子。重组蛋白的制备过程中生成的产物，除了目标蛋白外，还含有其它各种性质的蛋白、核酸、多糖等；这就要求将目标蛋白与其它成分分离，并得到一定的量，达到一定的纯度，同时要尽可能保留蛋白的生物活性，并使蛋白保持完整。简言之，重组蛋白纯化就是利用不同蛋白质之间的相似性与差异，依据蛋白之间的相似性可以去除非蛋白物质，在根据蛋白的差异性将目的蛋白分离出来。

重组蛋白的纯化处于重组蛋白表达的下游处理阶段，且与上游过程紧密相联。所以在对目的蛋白表达纯化时，要统一考虑和整体设计，并充分考虑上游对下游的影响。其中，重组蛋白的分离纯化需要考虑以下两点：

一、应尽可能利用蛋白质不同物理特性选择所用的分离纯化技术，而不是利用相同技术多次进行重组蛋白的纯化；

二、不同的蛋白在性质上有很大区别，每一步重组蛋白的纯化步骤都应当充分利用目的蛋白和杂质成分物理性质的差异。

现有技术中，针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型，包括离子交换法IEX、亲和层析AC、疏水和反相层析、凝胶过滤层析等。到目前为止，并没有一整套现成的方法把任何一种蛋白质从复杂的混合物中分离出来，只能依据目标蛋白的物理化学性质摸索一套综合的分离流程，以获得较高纯度的蛋白产品。

发明内容

基于现有技术中存在的上述不足，本发明提供一种重组蛋白的纯化方法。

为了达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种重组蛋白的纯化方法，包括将重组蛋白的发酵液依次经过Blue Bestarose6Fast Flow层析、Phenyl Bestarose High Performance-硫酸铵疏水层析、BestaroseDiamond MD层析、Phenyl Bestarose High Performance-氯化钠疏水层析和BestaroseDEAE Fast Flow层析。