[发明专利]一种重组蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种重组人血清白蛋白-生长激素的纯化方法，其特征在于，包括将重组人血清白蛋白-生长激素的发酵液依次经过Blue Bestarose 6Fast Flow层析、Phenyl BestaroseHigh Performance-硫酸铵疏水层析、Bestarose Diamond MD层析、Phenyl BestaroseHigh Performance-氯化钠疏水层析和Bestarose DEAE Fast Flow层析。

2.根据权利要求1所述的一种重组人血清白蛋白-生长激素的纯化方法，其特征在于，所述Blue Bestarose 6Fast Flow层析的工艺条件包括：所述重组人血清白蛋白-生长激素的发酵液的上样量为15～25mg/mL、流速为40～50cm/h、上样蛋白浓度≤15mg/mL；平衡液为20～30mM NaAC-2～3mM EDTA-0.25～0.4M NaCl，pH为5.0～5.5；第一步洗杂的洗杂液为0.25～0.35M NaCl-20～35mM Tris-2～3.5mM EDTA，pH为7.5～8.5；第二步洗杂的洗杂液为20～30mM Tris-2～3mM EDTA-5～10％乙醇，pH为7.5～8.5；洗脱液为20～30mM Tris-2～3mM EDTA-2～3M NaCl-20～30％乙醇，pH为7.5～8.5；在洗脱过程中收集第二个洗脱峰组份，以得到Blue Bestarose 6Fast Flow层析的下样。

3.根据权利要求2所述的一种重组人血清白蛋白-生长激素的纯化方法，其特征在于，所述Blue Bestarose 6Fast Flow层析的下样经过稀释配制后直接进行Phenyl BestaroseHigh Performance-硫酸铵疏水层析。

4.根据权利要求3所述的一种重组人血清白蛋白-生长激素的纯化方法，其特征在于，所述Phenyl Bestarose High Performance-硫酸铵疏水层析的工艺条件包括：将稀释配制后的Blue Bestarose 6Fast Flow层析的下样进行上样，上样量为10～15mg/mL、流速为40～50cm/h；平衡液为20～30mM Tris-2～3mM EDTA-0.7～1M硫酸铵，pH为7.5～8.5；洗脱液为20～30mM Tris-2～3mM EDTA-0.2～1M硫酸铵。

5.根据权利要求4所述的一种重组人血清白蛋白-生长激素的纯化方法，其特征在于，所述Phenyl Bestarose High Performance-硫酸铵疏水层析的过程包括多次洗脱处理，洗脱所用的洗脱液中的硫酸铵的浓度依次降低；当UV示数大于100时开始收集洗脱组份；其中，洗脱组份分段接样，根据相关蛋白及电泳结果进行合样处理，以得到Phenyl BestaroseHigh Performance-硫酸铵疏水层析的下样。

6.根据权利要求4所述的一种重组人血清白蛋白-生长激素的纯化方法，其特征在于，所述Bestarose Diamond MD层析的工艺条件包括：将Phenyl Bestarose HighPerformance-硫酸铵疏水层析的下样采用稀释液稀释至电导率为15～25mS/cm以进行上样，上样量为10～20mg/mL，流速为50～70cm/h；平衡液为20～30mM PB-0.3～0.4M NaCl，pH为7.5～8.5；洗杂液为20～30mM PB-0.6～0.8M NaCl，pH为7.5～8.5；洗脱液为20～30mMNaAC-2～3mM EDTA-0.2～0.3M NaCl，pH为3～5。

7.根据权利要求6所述的一种重组人血清白蛋白-生长激素的纯化方法，其特征在于，所述Bestarose Diamond MD层析的工艺条件还包括：洗脱样品采用去除洗脱峰首尾的方式进行收集，洗脱峰起始后开始接样至核酸蛋白检测仪吸收值降至约1/4峰高处停止接样，以得到Bestarose Diamond MD层析的下样。