[发明专利]用于定量监测山核桃干腐病侵染和传播的qLAMP方法及所用引物有效
| 申请号： | 201910201728.3 | 申请日： | 2019-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN109897908B | 公开（公告）日： | 2022-05-27 |
| 发明（设计）人： | 张传清;王琼伟;刘亚慧;徐炳潮 | 申请（专利权）人： | 浙江农林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 311300 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 定量 监测 山核桃 干腐病 侵染 传播 qlamp 方法 所用 引物 | ||
1.用于定量监测山核桃干腐病侵染和传播的qLAMP方法，其特征在于：
1)、q-LAMP反应
q-LAMP反应体系：
10×ThermoPol Buffer 2.0μL、10mM的dNTPs 2.0μL、25mM的MgCl2 5.0μL、5M的甜菜碱2.4μL、10×SYBR Green I 1.2μL、8U/μL的Bst DNA聚合酶1μL，20μM的FIP引物1.6μL、20μM的BIP引物1.6μL、10μM的F3引物0.25μL、10μM的B3引物0.25μL、DNA模板1μL，ddH2O补足至20μL；
扩增条件为恒温65.9℃，1min，进行80个循环；80℃反应10min，终止反应；
F3引物：5’—TGTCCATAGGTTCACCTCCA—3’；
B3引物：5’—AGATGGTCTGCCTGTGGT—3’；
FIP引物：5’—CAAAGTCAGCGCGATGCAGCGACCGGCCAATGCGTAAG—3’；
FIB引物：5’—AGGGTAACCAAATCGGTGCTGCGTCGATTCGCGTTAGCGG—3’；
2)、获得孢子数量、DNA浓度：
孢子个数的计算公式为
DNA浓度计算公式为
y为CT值。
2.根据权利要求1所述的用于定量监测山核桃干腐病侵染和传播的qLAMP方法，其特征在于：
q-LAMP反应体系中，FIP引物、BIP引物的终浓度为1.6μM，F3引物、B3引物的终浓度为0.125μM。
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