[发明专利]全人源PD-L1单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物医药工程技术领域，公开了一种全人源PD‑L1单克隆抗体及其制备方法，并对其生物学活性鉴定。本发明提供的全人源抗体是从已构建的全人源高通量合成型噬菌体展示文库中筛选出的，免疫原性低，且能够特异结合于胞外区PD‑L1蛋白，阻断PD1与PD‑L1的结合，恢复T细胞的功能。可作为免疫检查点抑制剂，为治疗PD‑L1阳性的癌症提供有效的手段。

技术领域

本发明属于生物医药工程技术领域，具体涉及一种全人源PD-L1单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

T细胞的活化是免疫系统发挥作用的重要步骤，不仅需要抗原递呈细胞(APC)所提供的第一信号，同时也受到共刺激信号(第二信号)的调节。共刺激信号是一类细胞表面的膜蛋白，起到协同调节T细胞增殖、活化及分化的作用。

程序性死亡因子1配体1(programmed death 1ligand 1，PD-L1)又称CD274，为B7家族成员，是PD-1的配体。PD-L1属于I型跨膜蛋白，共290个氨基酸，包含1个IgV样区、1个IgC样区、1个跨膜疏水区和1个由30个氨基酸组成的胞内区。与其他B7家族分子不同的是，PD-L1具有负向调节免疫应答的作用。研究发现，PD-L1主要表达于活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞等，除淋巴细胞外，PD-L1也表达于其他多种组织如胸腺、心脏、胎盘等的内皮细胞，以及各类非淋巴系如黑色素瘤、肝癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、头颈癌等。PD-L1在调节自身反应性T、B细胞和免疫耐受方面具有一定广泛性，并且在外周组织T和B细胞应答中起作用。PD-L1在肿瘤细胞上的高表达与癌症患者的不良预后相关。

与PD-L1相结合的程序性死亡因子1(programmed death-1，PD-1)又称CD279，是CD28家族成员，其胞质区含有2个酪氨酸残基，靠近N端的1个位于免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM)中，靠近C端的1个位于免疫受体酪氨酸转化基序(immunoreceptor tyrosine-based switch motif，ITSM)中。PD-1主要表达在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞表面。在正常情况下，PD-1能够抑制T淋巴细胞的功能，促进Treg的功能，从而抑制自身免疫应答，防止自身免疫性疾病的发生。但在肿瘤的发生中，肿瘤细胞表达的PD-L1与PD-1结合后却能通过对淋巴细胞的抑制性作用促进肿瘤的免疫逃逸。PD-L1与PD-1的结合可导致多种生物学变化，引起免疫调控，如能够抑制淋巴细胞的增殖和活化、抑制CD4+T细胞向Th1和Th17细胞分化、抑制炎性细胞因子的释放等。

噬菌体抗体库技术模拟了人类B细胞的分化成熟过程，首先通过分子生物学手段将人类抗体的重链和轻链可变区基因连接起来形成单链抗体(Single-chain variablefragment,scFv)，插入噬菌体载体上，使单链抗体scFv展示在噬菌体表面，再用特定的抗原筛选出特异性的噬菌体抗体，并用大肠杆菌表达大量单链抗体。

单克隆抗体在癌症的检测及生物靶向治疗方面成功的应用，引起了肿瘤治疗的变革。然而，传统的单抗(150kD)分子质量过大，难穿透组织，造成肿瘤区域的有效浓度较低，治疗效果不充分；传统的抗体具有很高的免疫原性，而改造的抗体很难达到原来的亲和力。此外，完全人源化的传统抗体开发周期长，生产成本高，稳定性不够等诸多因素限制其在临床中的应用及普及。