[发明专利]全人源PD-L1单克隆抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种全人源PD-L1单克隆抗体，其特征在于：包含轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3和重链HCDR1、HCDR2、HCDR3；

所述轻链LCDR1序列是RASQTVIGX1YLA(SEQ ID NO：1)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述轻链LCDR2序列是FGTSFRAT(SEQ ID NO：2)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述轻链LCDR3序列是LQX2QGFPX3T(SEQ ID NO：3)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述重链HCDR1序列是SGFTFDX4YWMH(SEQ ID NO：4)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述重链HCDR2序列是X₅IX₆DX₇GGX₈TX₉YADSVKS(SEQ ID NO：5)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述重链HCDR3序列是SQDLAY(SEQ ID NO：6)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

其中X₁是S或R；X₂是T或R；X₃是Y或L；X₄是R或E；X₅是T或S；X₆是D或T；X₇是S或T；X₈是E或V；X₉是N或H。

2.一种如要求1所述的全人源PD-L1单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)构建噬菌体展示文库：通过检索数据库人源和鼠源的抗体基因序列，比较分析抗体骨架序列和CDR区在人类抗体库中的出现频率和偏向性，确定了构建抗体库的germline基因和CDR区，其中，CDR区使用简并密码子进行了长度多样性和序列多样性设计，全部轻链CDR基因库和重链的CDR1及CDR2基因采用亚磷酰胺三酯基因合成方法合成，重链CDR3基因采用高通量芯片基因合成方法合成；

(2)PD-L1的表达纯化：构建含有PD-L1-ECD序列(GenBank Accession:AY714881.1)的真核表达载体pCD-PD-L1-AVI-His，瞬转Expi293细胞后收集上清，Ni-NTA亲和树脂纯化得到PD-L1蛋白；

(3)噬菌体展示文库筛选：以生物素化的PD-L1蛋白为抗原，通过液相-固相-液相三轮淘选和富集，最终得到一个亲和力较优的具有阻断活性的候选克隆。

(4)亲和力成熟：分析候选克隆的CDR区序列，设计引物对LCDR3、HCDR1、HCDR2、和HCDR3区进行突变，构建4个突变CDR区的质粒库和噬菌体展示库，筛选后得到若干亲和力提高的具有阻断活性的候选克隆。

3.权利要求1至2中任一所述的全人源PD-L1单克隆抗体，其特征在于，其中所述抗体是IgG1形式的抗体或IgG2形式或IgG4形式的抗体或抗原结合片段。

4.权利要求1至2中任一所述的全人源PD-L1单克隆抗体，其特征在于，其抗原结合片段是选自以下的抗体片段：Fab、Fab’-SH、Fv、scFv或(Fab’)2片段。

5.一种多核苷酸，其特征在于：包含权利要求1所述的全人源PD-L1单克隆抗体。

6.一种载体或载体组，其特征在于：包含权利要求5所述的多核苷酸。

7.一种宿主细胞，其特征在于：包含权利要求6所述的载体或载体组，优选地，所述宿主细胞是原核的或真核的，更优选的选自酵母细胞、哺乳动物细胞或适用于制备抗体或其抗原结合片段的其它细胞。

8.一种免疫偶联物，其特征在于：包含权利要求1项所述的全人源PD-L1单克隆抗体。