[发明专利]基于飞行时间质谱的高度近视基因检测试剂盒、芯片及高度近视检测方法有效

申请号：	201910181268.2	申请日：	2019-03-11
公开（公告）号：	CN109750103B	公开（公告）日：	2022-10-04
发明（设计）人：	蓝章彰;杨传春;陈川;张丽娟;张亚琦;崔孝礼;韩菲菲;丁利杰;李沛;汪凯	申请（专利权）人：	深圳乐土生物科技有限公司
主分类号：	C12Q1/6883	分类号：	C12Q1/6883;C12Q1/6858
代理公司：	深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281	代理人：	孙银行;彭家恩
地址：	518000 广东省深圳市大***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	基于飞行时间高度近视基因检测试剂盒芯片方法
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【权利要求书】：

1.一种检测如下10个位点的基因型的多重PCR扩增引物对和延伸引物在制备基于飞行时间质谱的高度近视基因检测试剂盒中的应用，

rs10453441：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5；和SEQ ID NO:6；

rs8027411：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:10，SEQ ID NO: 11；和SEQ ID NO:12；

rs560766：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:17；和SEQ ID NO:18；

rs10034228：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:22，SEQ ID NO:23；和SEQ ID NO:24；

rs7837791：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:25，SEQ ID NO:26；和SEQ ID NO:27；

rs9318086：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:29；和SEQ ID NO:30；

rs6469937：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:35；和SEQ ID NO:36；

rs13382811：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:55，SEQ ID NO:56；和SEQ ID NO:57；

rs7042950：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:59；和SEQ ID NO:60；

rs11601239：多重PCR扩增引物对和延伸引物分别是：SEQ ID NO:70，SEQ ID NO:71；和SEQ ID NO:72。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括如下一种或多种组分：

（1）多重PCR扩增组分，其包括dNTP混合物、PCR缓冲液、MgCl₂和Taq酶中的一种或多种；

（2）虾碱性磷酸酶及其缓冲液中的至少一种；

（3）延伸反应组分，其包括延伸酶、终止混合物和延伸缓冲液中的一种或多种；

（4）用于纯化DNA的阳离子交换树脂；和

（5）HPLC级水。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括基因组DNA提取试剂盒。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因组DNA提取试剂盒是用于从血液或者口腔细胞中提取DNA的试剂盒。

5.一种检测10个位点的基因型的多重PCR扩增引物对和延伸引物在制备基于飞行时间质谱的高度近视基因检测芯片中的应用，其特征在于，所述芯片包括光谱晶片和固定于所述光谱晶片上的纯化的DNA产物，其中所述DNA产物通过如下方法制得：

（1）使用检测10个位点的基因型的多重PCR扩增引物对对受检者基因组的所述10个位点进行多重PCR扩增；

（2）利用虾碱性磷酸酶消化所述多重PCR扩增的产物中多余的dNTP；

（3）加入检测10个位点的基因型多重PCR扩增的延伸引物，通过单碱基延伸ddNTP得到小片段DNA产物；和

（4）使用阳离子交换树脂纯化所述小片段DNA产物，再将纯化后的产物点到所述光谱晶片上，形成共结晶薄膜；

其中，检测10个位点的基因型的多重PCR扩增引物对和延伸引物，具体为，