[发明专利]一种诱导嗅黏膜间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元的方法

说明书

本发明提供了一种诱导嗅黏膜间充质干细胞定向多巴胺能神经元分化的方法，属于干细胞诱导分化技术领域，包括：将嗅黏膜间充质干细胞采用诱导液在体积浓度为1～5％O₂环境下诱导培养18～24d，得到多巴胺能神经元，所述诱导液中含有嗅鞘细胞分泌蛋白。采用本发明的方法，将嗅黏膜间充质干细胞分化为多巴胺能神经元，得到的多巴胺能神经元的功能完整。

技术领域

本发明属于干细胞诱导分化技术领域，具体提供一种诱导嗅黏膜间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元分化的方法。

背景技术

帕金森病是因脑内黑质纹状体内的多巴胺能神经元丢失所致的一种神经退行性疾病，目前多采用药物治疗，但是药物治疗依然存在着很多局限性和耐药性。随着干细胞的研究不断深入，神经修复、替代与再生已经被大多数学者所认可，而且干细胞移植治疗帕金森病已是目前神经学科界领域研究的热点之一。目前，有研究表明神经干细胞、胚胎干细胞、多能干细胞等都能在特定的环境下被诱导分化成多巴胺能神经元，但是这些细胞仍有不少问题存在，如伦理问题、免疫排斥问题以及细胞来源不足等。嗅黏膜间充质干细胞(Olfactory Mucosa Mesenchymal Stem Cells，OM-MSCs)不仅具有自我复制、造血支持以及免疫调节等功能，还具有多向分化的潜能。

目前诱导间充质干细胞向神经元方向分化的方法主要是通过单因子或者几种细胞因子联合起来进行诱导，如很多学者用脑源性神经生长因子(BDNF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)等分别单独诱导神经干细胞向神经元方向分化，也有部分学者将上述几种细胞因子联合起来共同对神经干细胞进行诱导分化，但是大部分研究所得到的靶细胞无正常神经元电生理特性及分泌神经递质等功能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种诱导嗅黏膜间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元的方法，采用本发明提供的方法能够获取更为丰富且功能完整的多巴胺能神经元。

本发明提供了一种诱导嗅黏膜间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元的方法，包括：

将嗅黏膜间充质干细胞采用诱导液在体积浓度为1～5％O₂环境下诱导培养18～24d，得到多巴胺能神经元；

所述诱导液中含有嗅鞘细胞分泌蛋白。

优选的，所述诱导液的制备方法，包括：

采用常规方法培养得到嗅鞘细胞培养物，用无血清纯化培养基纯化嗅鞘细胞培养物，当所述嗅鞘细胞培养物中嗅鞘细胞的纯度在90％以上时，开始收集嗅鞘细胞纯化液，收集嗅鞘细胞纯化液根据嗅鞘细胞的纯度、状态，为45～50h时嗅鞘细胞纯化液与含血清培养基交替换液，再继续使用无血清纯化培养基培养嗅鞘细胞，再培养45～50h后收集的无血清嗅鞘细胞上清液即为诱导液。

优选的，所述O₂的体积浓度为3％。

优选的，所述培养的时间为21d。

优选的，所述无血清纯化培养基以DMEM/F12液体培养基为基础培养基，每100ml包括：1～3mg转铁蛋白、氢化可的松5～15ul、胰岛素5～15ul、谷氨酰胺1～3ml、碱性成纤维生长因子18～22ng和表皮生长因子18～22ng。

优选的，所述嗅黏膜间充质干细胞传至第4代时进行诱导。

优选的，所述诱导培养的温度为35～42℃。

本发明提供了一种诱导嗅黏膜间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元的方法，将嗅黏膜间充质干细胞采用含有嗅鞘细胞分泌蛋白的诱导液在1～5％的O₂环境下诱导，能够将嗅黏膜间充质干细胞分化为多巴胺能神经元。

本发明实施例的结果显示：采用本发明的方法，将嗅黏膜间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元，得到的多巴胺能神经元的功能完整。

附图说明