[发明专利]一种诱导嗅黏膜间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元的方法有效
| 申请号： | 201910180130.0 | 申请日： | 2019-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN109735493B | 公开（公告）日： | 2021-09-14 |
| 发明（设计）人： | 卢明;卓毅;段答 | 申请（专利权）人： | 湖南师范大学 |
| 主分类号： | C12N5/0793 | 分类号： | C12N5/0793 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 410081 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 诱导 黏膜 间充质 干细胞 定向 化为 多巴胺 神经元 方法 | ||
1.一种诱导嗅黏膜间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元分化的方法，包括：
将嗅黏膜间充质干细胞采用诱导液在体积浓度为1~5%O2环境下诱导培养18~24d，得到多巴胺能神经元；
所述诱导液中含有嗅鞘细胞分泌蛋白；
所述诱导培养过程中每48h更换1次诱导液；
所述诱导培养过程中应用的无血清纯化培养基以DMEM/F12液体培养基为基础培养基，每100ml包括：1~3mg转铁蛋白、氢化可的松5~15μl、胰岛素5~15μl、谷氨酰胺1~3ml、碱性成纤维生长因子18~22ng和表皮生长因子18~22ng。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导液的制备方法，包括：
采用常规方法培养得到嗅鞘细胞培养物，用无血清纯化培养基纯化嗅鞘细胞培养物，当所述嗅鞘细胞培养物中嗅鞘细胞的纯度在90%以上时，开始收集嗅鞘细胞纯化液，收集嗅鞘细胞纯化液根据嗅鞘细胞的纯度、状态，为45~50h时嗅鞘细胞纯化液与含血清培养基交替换液，再继续使用无血清纯化培养基培养嗅鞘细胞，再培养45~50h后收集的无血清嗅鞘细胞上清液即为诱导液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述O2的体积浓度为3%。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养的时间为21d。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嗅黏膜间充质干细胞传至第4代时进行诱导。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导培养的温度为35~42℃。
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