[发明专利]一种用于纯化组氨酸标记蛋白质的纳米磁珠的制备方法

权利要求书

1.一种用于纯化组氨酸标签蛋白质的纳米磁珠，其特征在于，所述纳米磁珠是外壳为IDA功能化交联海藻酸钠，内核为Fe₃O₄纳米颗粒的核壳结构；所述外壳上海藻酸钠的羧基和表面修饰的IDA螯合剂螯合了金属镍离子或钴离子；

所述纳米磁珠是通过包括如下步骤的方法制备而得的：

S1、以海藻酸钠、FeCl₃·6H₂O、NaAc·3H₂O和PEG为原料，乙二醇和去离子水为溶剂，通过溶剂热反应生成Fe₃O₄纳米颗粒；

S2、所述Fe₃O₄纳米颗粒和海藻酸钠通过环氧氯丙烷交联反应及活化，得到环氧基改性海藻酸钠包被的核壳结构的磁性纳米磁珠；

S3、步骤S2得到的磁性纳米磁珠表面引入亚氨基二乙酸螯合剂分子，得到IDA改性的纳米磁珠，即所述纳米磁珠。

2.根据权利要求1所述的用于纯化组氨酸标签蛋白质的纳米磁珠，其特征在于，所述纳米磁珠是粒径为100～200纳米的单分散颗粒。

3.根据权利要求1所述的用于纯化组氨酸标签蛋白质的纳米磁珠，其特征在于，步骤S1中，每0.1～2毫升去离子水对应海藻酸钠0.1～1克、FeCl₃·6H₂O 0.05～1克、NaAc·3H₂O0.05～3克和PEG 0.1～2毫升；所述溶剂热反应的反应温度为100～250℃，反应时间为2～48个小时。

4.根据权利要求1所述的用于纯化组氨酸标签蛋白质的纳米磁珠，其特征在于，步骤S2包括：

以去离子水和二甲基亚砜为溶剂，Fe₃O₄纳米颗粒、海藻酸钠、氢氧化钠，以及交联剂环氧氯丙烷在50～80℃条件下反应2～8小时，得到海藻酸钠包被的核壳结构的磁性纳米磁珠；

以去离子水和二甲基亚砜为溶剂，所述海藻酸钠包被的核壳结构的磁性纳米磁珠、氢氧化钠和环氧氯丙烷在40～50℃条件下反应2～4小时，得到所述环氧基改性海藻酸钠包被的核壳结构的磁性纳米磁珠。

5.根据权利要求1所述的用于纯化组氨酸标签蛋白质的纳米磁珠，其特征在于，步骤S3中，引入亚氨基二乙酸螯合剂分子是通过以去离子水和二甲基亚砜为溶剂，步骤S2得到的磁性纳米磁珠与亚氨基二乙酸、无水碳酸钠和氢氧化钠在25～50℃条件下反应12～24小时来实现的。

6.根据权利要求1所述的用于纯化组氨酸标签蛋白质的纳米磁珠，其特征在于，步骤S3还包括IDA改性的纳米磁珠与浓度为0.1～2mol/L的硫酸镍或硫酸钴溶液在20～60℃下孵育0.5～3小时，磁性分离去上清，得到螯合镍或钴金属离子的纳米磁珠的步骤。

7.一种根据权利要求1所述的纳米磁珠在纯化组氨酸标签蛋白质中的用途。

8.一种应用根据权利要求1所述的纳米磁珠纯化组氨酸标签蛋白质的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

A1、将螯合镍或钴金属离子的所述纳米磁珠，磁性分离去上清，再用细胞裂解缓冲液洗涤磁珠除去未结合的金属离子；

A2、将裂解的细胞液与磁珠在4±1℃混合孵育15～90分钟，收集磁珠；

A3、洗涤液洗涤磁珠除去杂蛋白；

A4、洗脱液洗脱磁珠上的组氨酸标签蛋白质。