[发明专利]一种囊尾蚴体外培养方法

权利要求书

1.囊尾蚴体外培养方法，其特征在于从宿主动物体内分离完整的囊尾蚴，在无菌条件下用其中加入至少一种抗生素的PBS清洗干净，然后转入其内加有培养液的培养容器内，培养容器置于二氧化碳细胞培养箱内，在温度37 ℃、CO₂浓度5%、相对湿度70%条件下进行培养，虫体开始培养后的第6 h及第12 h各换液1次，每次换液时尽量除去陈旧培养液，加入新鲜的完全培养液8 ml/瓶/次，以后每48 h换液1次，所用的PBS中加有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml的链霉素，所述的培养液为其中添加有胎牛血清、青霉素、链霉素、两性霉素B、L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的RPMI1640培养液，其中：胎牛血清含量为10%（v/v）；所述抗生素终浓度为青霉素100 U/ml，链霉素100 μg/ml，两性霉素B 1.25 μg/mL；所述L-谷氨酰胺终浓度为2.5 mM；加入碳酸氢钠调整培养液pH为7.2~7.4。

2.一种豆状囊尾蚴离体培养方法，其特征在于将从感染兔的腹腔中新鲜分离完整的豆状囊尾蚴在无菌条件下用其中加入至少一种抗生素的PBS清洗干净，然后转入其内加有培养液的培养容器内，培养容器置于二氧化碳细胞培养箱内，在温度37 ℃、CO₂浓度5%、相对湿度70%条件下进行培养，虫体开始培养后的第6 h及第12 h各换液1次，每次换液时尽量除去陈旧培养液，加入新鲜的完全培养液8 ml/瓶/次，以后每48 h换液1次，所用的PBS中加有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml的链霉素，所述的培养液为其中添加有胎牛血清、青霉素、链霉素、两性霉素B、L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的RPMI1640培养液，其中：胎牛血清含量为10%（v/v）；所述抗生素终浓度为青霉素100 U/ml，链霉素100 μg/ml，两性霉素B 1.25 μg/mL；所述L-谷氨酰胺终浓度为2.5 mM；加入碳酸氢钠调整培养液pH为7.2~7.4。

3.根据权利要求1或2所述的豆状囊尾蚴离体培养方法，其特征在于初始培养液的加入量为：6孔板加入量为3 ml /孔，或者细胞瓶加入量为 8 ml/（25 cm²）瓶。

4.一种用于收集豆状囊尾蚴外泌体的豆状囊尾蚴离体培养方法，其特征在于将从感染兔的腹腔中新鲜分离完整的豆状囊尾蚴在无菌条件下用其中加入至少一种抗生素的PBS清洗干净，然后转入其内加有进行过去除外泌体处理的培养液的培养容器内，培养容器置于二氧化碳细胞培养箱内，在温度37 ℃、CO₂浓度5%、相对湿度70%条件下进行培养，虫体开始培养后的第6 h及第12 h各换液1次，每次换液时尽量除去陈旧培养液，加入新鲜的完全培养液8 ml/瓶/次，以后每48 h换液1次，所用的PBS中加有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml的链霉素，所述的培养液为其中添加有青霉素、链霉素、两性霉素B、L-谷氨酰胺和碳酸氢钠及进行过去除外泌体处理的胎牛血清的RPMI1640培养液，其中：胎牛血清含量为10%（v/v）；所述抗生素终浓度为青霉素100 U/ml，链霉素100 μg/ml，两性霉素B 1.25 μg/mL；所述L-谷氨酰胺终浓度为2.5 mM；加入碳酸氢钠调整培养液pH为7.2~7.4。

5.根据权利要求4所述的豆状囊尾蚴离体培养方法，其特征在于初始培养液的加入量为：6孔板加入量为3 ml /孔，或者细胞瓶加入量为 8 ml/（25 cm²）瓶。

6.收集豆状囊尾蚴代谢分泌抗原和外泌体的方法，其特征是按权利要求4或5所述的方法进行豆状囊尾蚴培养，在第二次换液后，每48 h收集虫体培养液一次，经浓缩或者超速离心等方法进一步获得代谢分泌抗原或外泌体。