[发明专利]一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的制备方法及基因载体

说明书

本发明公开一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的制备方法及基因载体，涉及基因载体技术领域。所述聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的制备方法包括以下步骤：在惰性气氛下，向米糠多糖铁溶液中依次加入三乙胺和N,N‑羰基‑二咪唑溶液，避光反应形成反应溶液；将聚乙烯亚胺溶液加入到所述反应溶液中避光反应形成粗样液，并在反应过程中控制混合溶液呈碱性；对所述粗样液进行透析，取透过液醇沉、冷冻干燥后得聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁。本发明还提出一种基因载体，包括聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁。本发明旨在制备一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁，制备工艺简单、制备成本低，且制得的聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁具有较低的细胞毒性和高转染效率。

技术领域

本发明涉及基因载体技术领域，特别涉及一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的制备方法及基因载体。

背景技术

裸露的外源基因DNA难以进入细胞且容易被机体或细胞降解，因而难以表达，所以应寻找对病变组织具有选择性、高转染率及低毒性的载体协助目的基因进入靶细胞，用于转运目的基因进入靶细胞的载体即为基因载体，选择合适的基因载体是基因治疗的成功关键。基因载体主要有病毒载体和非病毒载体两类。目前常见的非病毒载体包括高分子载体和纳米材料载体，普遍存在制备反应复杂、细胞毒性高、转染效率有限的问题，限制了基因载体的进步发展。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的制备方法及基因载体，旨在制备一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁，制备工艺简单、制备成本低，且制得的聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁具有较低的细胞毒性和高转染效率。

为实现上述目的，本发明提出了一种制备聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的方法，所述聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的制备方法包括以下步骤：

在惰性气氛下，向米糠多糖铁溶液中依次加入三乙胺和N,N-羰基-二咪唑溶液，避光反应形成反应溶液；

将聚乙烯亚胺溶液加入到所述反应溶液中避光反应形成粗样液，并在反应过程中控制混合溶液呈碱性；

对所述粗样液进行透析，取透过液醇沉、冷冻干燥后得聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁。

优选地，米糠多糖铁、N,N-羰基-二咪唑和聚乙烯亚胺的质量比为1：(2.0～3.0):(7.5～9.0)。

优选地，所述在惰性气氛下，向米糠多糖铁溶液中依次加入三乙胺和N,N-羰基-二咪唑溶液，避光反应形成反应溶液的步骤中，向米糠多糖铁溶液中加入三乙胺后米糠多糖铁溶液的pH为8～9；和/或，

所述避光反应时间为3～5h。

优选地，所述将聚乙烯亚胺溶液加入到所述反应溶液中避光反应形成粗样液，并在反应过程中控制混合溶液呈碱性的步骤包括：

将聚乙烯亚胺溶液滴加到所述反应溶液中，同时向所述反应溶液中滴加三乙胺并控制pH为8.8～9.2，避光条件下搅拌反应，得粗样液；

所述将聚乙烯亚胺溶液滴加到所述反应溶液中的时间不超过1h；和/或，

所述搅拌反应的时间为22～26h。

优选地，所述对所述粗样液进行透析，取透过液醇沉、冷冻干燥后得聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的步骤中，

所述透析时，使用的透析袋的截留分子量为3000～3200；

所述透析的时间为36～60h；和/或，

所述醇沉的时间为36～50h。

优选地，所述在惰性气氛下，向米糠多糖铁溶液中依次加入三乙胺和N,N-羰基-二咪唑溶液，避光反应形成反应溶液的步骤之前，还包括：

将米糠多糖铁溶于有机溶剂中，得米糠多糖铁溶液；