[发明专利]一种异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法，其特征在于，包括如下过程：

富集培养，

取淤泥样品，放入富集培养基中，25-35℃、120-180r/min摇床充分振荡培养8-12h，得到菌悬液，再取菌悬液放入富集培养基进行再次富集培养，25-35℃、120-180r/min振荡培养8-12h；

菌株初筛选，

取富集后的种子液，加入到筛选培养基中，进行25-35℃、120-180r/min振荡培养12-48h的训化，

将训化后的培养基菌液在固体筛选培养基上进行涂布分离，在25℃-35℃的培养箱中培养，

挑取培养基上的菌落在新的筛选培养基上进行点板，在25℃-35℃的培养箱中培养，

将点板后长出的菌落，在新的筛选培养基上划线分离，同时对点板后的固体平板上长出的菌落分别滴纳氏试剂，并观察每个菌落形成的透明圈大小，做好标记，

选择透明圈大的对应的菌落，重复在新的筛选培养基上划线分离，直到平板上的菌落无差异，即为纯菌，该菌株为杰丁毕赤酵母Pichia jadinii MA1，保藏号为CCTCC M2018289。

2.根据权利要求1所述的一种异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法，其特征在于，

富集培养，

取淤泥样品，放入富集培养基中，25-35℃、120-180r/min摇床充分振荡培养8-12h，得到第一次富集后的种子液，取第一次富集后的种子液放入富集培养基进行再次富集培养，25-35℃、120-180r/min振荡培养8-12h，得到第二次富集后的种子液。

3.根据权利要求2所述的一种异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法，其特征在于，富集培养，

取淤泥样品，放入富集培养基中培养，加入灭菌后的玻璃珠，振荡直至样品完全打散并与培养基充分混匀，得到第一次富集后的种子液，再取第一次富集后的种子液放入富集培养基进行再次富集培养，25-35℃、120-180r/min振荡培养8-12h，得到第二次富集后的种子液。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的一种异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法，其特征在于，所述富集培养基为LB培养基。

5.根据权利要求4所述的一种异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法，其特征在于，所述LB培养基组成有：蛋白胨10份，酵母粉5份，NaCl 10份，pH＝7。

6.根据权利要求1所述的一种异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法，其特征在于，

菌株初筛选，

取富集后的种子液，加入到筛选培养基中，25-35℃、120-180r/min进行振荡培养12-48h，此为第一个驯化周期，取上一次的培养物移至第二期的驯化培养基中，25-35℃、120-180r/min振荡培养12-48h，此为第二个驯化周期，以此类推，进行多次的驯化；

将训化后的培养基菌液在固体筛选培养基上进行涂布分离，在25℃-35℃的培养箱中培养；挑取培养基上的菌落在新的筛选培养基上进行点板，在25℃-35℃的培养箱中培养；

将点板后长出的菌落，在新的筛选培养基上划线分离，同时对点板后的固体平板上长出的菌落分别滴纳氏试剂，并观察每个菌落形成的透明圈大小，做好标记，

选择透明圈大的对应的菌落，重复在新的筛选培养基上划线分离，直到平板上的菌落无差异，即为纯菌，该菌株为杰丁毕赤酵母Pichia jadinii MA1，保藏号为CCTCC M2018289。