[发明专利]一种用于检测肿瘤M2型丙酮酸激酶的试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开了一种用于检测肿瘤M2型丙酮酸激酶的试剂盒及制备方法，试剂盒包括试纸卡，试纸卡包括底板，底板沿样品流动方向设有端头依次连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫，结合垫吸附有量子点标记的捕获抗体，硝酸纤维膜沿样品流动方向依次设有检测带和质控带，检测带包被有检测抗体，质控带包被有IgG；捕获抗体、检测抗体为抗肿瘤M2型丙酮酸激酶抗体，捕获抗体与检测抗体结合肿瘤M2型丙酮酸激酶的不同表位；捕获抗体在标记量子点前，采用单磷酸糖修饰捕获抗体。本发明试剂盒具有高灵敏性、特异性，且操作快速简便、结果准确、经济适用。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，尤其涉及一种用于检测肿瘤M2型丙酮酸激酶的试剂盒及制备方法。

背景技术

结直肠癌是世界上常见的三大恶性肿瘤之一，其死亡率排第三位。近年来，随着人们生活水平的提高以及饮食结构的改变，其发病率呈明显上升趋势。但是，目前国内外对结直肠癌的早期诊断仍处于较低水平，约半数患者明确诊断时已进入中期和晚期结直肠癌。因此，提高结直肠癌的早期诊断是目前国内外迫切需要解决的关键问题。目前早期诊断结直肠癌有以下几种的常用技术：(1)大便隐血试验是结直肠癌常用的筛查方法，操作简便、无创，主要缺点是灵敏度低、特异性差，假阳性结果高；(2)电子结肠镜(简称内镜)是发现及诊断结直肠癌最有效的手段，也是目前早期诊断结直肠癌的主要方法，尤其是在高危人群的检查具有重要的临床价值；因其为创伤性检查伴有出血、肠穿孔等危险的副作用、且需要一定的设备和仪器，这对操作人员的专业水平要求较高，故在大范围人群的检查存在着很大的局限性；(3)电化学发光技术检测常用肿瘤标志物，如CEA、CA199、CA242、CA50，因其阳性率低、缺乏特异性，不合适用于结直肠癌的早期诊断；(4)采用PCR技术检测患者血清或粪便内的DNA和检测微小RNA的浓度对结直肠癌治疗监测和预后评价有一定的价值，但它们在应用于结直肠癌的早期诊断方面还有待于进一步研究。近年来，国内外学者开始致力于寻找敏感、特异、可靠、有效的结直肠癌新生物标志物以及建立无创伤性检查和实验方法来提高早期诊断结直肠癌的诊断率。国外学者认为肿瘤M₂型丙酮酸激酶(M₂-PK)在血浆、粪便检测其灵敏度和特异性较高，有望成为结直肠癌新型肿瘤标志物。

丙酮酸激酶有4种不同的同工酶，分别为L型、R型、M1型、M2型，这4种同工酶的分布具有组织特异性。M2-PK主要分布于肺组织、肾远曲小管、胚胎组织以及增殖或未分化的组织中，正常细胞活性状态下是以高活性的四聚体形式存在。在肿瘤细胞中，已证实由于酪氨酸受体磷酸化导致四聚体型裂解，转变为主要以二聚体的形式存在，并大量表达，因此，称为tumor M2-PK，tumorM2-PK升高见于大多数恶性肿瘤的患者。尽管来源于不同组织的肿瘤和不同的阶段的肿瘤，tumor M2-PK表达的水平有差别，但是tumor M2-PK作为肿瘤标志物是很有应用价值的。tumor M2-PK是近年来研究较多的一种新型肿瘤标志物，其在恶性肿瘤的早期诊断和判断预后中显示较好的应用前景。

人类结直肠上皮更新速度很快，约以每小时1％的速度更新，每天有近10¹⁰正常上皮细胞脱落。1个含有10⁹细胞的1cm大小肿瘤组织如果以正常速度更新，则脱落入肠道的结直肠上皮细胞总量中至少有1％来自该肿瘤的组织。肿瘤细胞脱落入肠腔随着粪便排出体外，为粪便中脱落细胞突变基因及其表达产物的检测奠定了基础。面向肠腔的肿瘤向肠腔内分泌代谢产物或与某些肿瘤特有的物质，及脱落的肿瘤细胞大量分解，释放细胞内物质，而且通过粪便避免了肿瘤标志物被肝脏代谢分解，从而使得通过粪便检测肿瘤标志物的可行。因此，通过检测粪便中tumor M2-PK水平来诊断结直肠癌是一种客观、可靠的实验方法。