[发明专利]一种用于检测肿瘤M2型丙酮酸激酶的试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种用于检测肿瘤M2型丙酮酸激酶的试纸卡，其特征在于，所述试纸卡包括底板，底板沿样品流动方向设有端头依次连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫，所述结合垫吸附有量子点标记的捕获抗体，硝酸纤维膜沿样品流动方向依次设有检测带和质控带，所述检测带包被有检测抗体，所述质控带包被有IgG；

所述捕获抗体为抗肿瘤M2型丙酮酸激酶抗体，所述捕获抗体在标记量子点前，采用单磷酸糖修饰捕获抗体的表面；所述检测抗体为抗肿瘤M2型丙酮酸激酶抗体，所述捕获抗体与检测抗体结合肿瘤M2型丙酮酸激酶的不同表位；

所述单磷酸糖修饰的捕获抗体是通过以下方法进行制备：向捕获抗体中加入单磷酸糖和牛血清白蛋白缓冲液，摇匀后室温放置1～2h；再将溶液的pH值调节到8～11即可。

2.如权利要求1所述的试纸卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：所述结合垫按1～3μL/cm喷涂0.1～5mg/mL量子点标记的捕获抗体溶液，所述检测带按1～3μL/cm喷涂0.1～5mg/mL检测抗体溶液，所述质控带按1～3μL/cm喷涂0.1～5mg/mL IgG溶液；量子点标记的捕获抗体溶液、检测抗体溶液和羊抗鼠IgG溶液的溶剂为包被缓冲液，所述包被缓冲液为包含20～150mM NaCl、0.05％～3％PEG、0.2％～1％海藻糖、2～10mg/mL BSA和0.05％NaN₃的10～100mM PBS缓冲液。

3.如权利要求2所述的试纸卡的制备方法，其特征在于，所述量子点标记的捕获抗体是通过以下步骤进行制备：

S1)量子点活化：采用N-羟基硫代琥珀酰亚胺将CdSe/ZnS量子点表面的羧基活化；

S2)采用单磷酸糖修饰捕获抗体的表面，即得活化的捕获抗体；

S3)将活化的量子点放置至室温，向活化的量子点中加入EDC溶液、N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液和BSA溶液，摇匀后加入所述活化的捕获抗体，摇匀后进行孵育，孵育过程中加入EDC溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液；孵育后再加入甲醇，混合后避光振荡；再加入β－巯基乙醇进行终止，终止反应后采用β－巯基乙醇进行透析；透析后离心去除上清，即得量子点标记的捕获抗体。

4.如权利要求3所述的试纸卡的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，活化的量子点的浓度为1～10μM；在步骤S2中，所述捕获抗体的浓度为10～100μg/ml；在步骤S3中，所述BSA溶液的浓度为20～200mg/mL，活化的量子点与活化的捕获抗体的质量比为(1:2)～(1:10)。

5.如权利要求2所述的试纸卡的制备方法，其特征在于，所述结合垫按2μL/cm喷涂0.1～5mg/mL量子点标记的捕获抗体溶液，所述检测带按2μL/cm喷涂0.1～5mg/mL检测抗体溶液，所述质控带按2μL/cm喷涂0.1～5mg/mL IgG溶液。

6.如权利要求2所述的试纸卡的制备方法，其特征在于，所述样品垫采用预处理液进行浸泡，再烘干；所述结合垫在喷涂前，采用预处理液进行浸泡，再烘干；所述预处理液为含0.02％～0.1％Tween-20的0.01M且pH为7～7.3PBS缓冲液。

7.一种包含如权利要求1所述的试纸卡的试剂盒，所述试剂盒还包含卡壳，卡壳包括背卡和上盖，背卡设有卡槽，所述试纸卡镶嵌于所述卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测带和质控带的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含样品分离缓冲液，所述样品分离缓冲液为包含有介质、0.45％～0.9％氯化钠、0.02％～0.1％Tween-20和20～200mg/mL牛血清白蛋白的PBS缓冲液；当所述介质为氯化铯时，样品分离缓冲液中氯化铯浓度为10％～30％；当所述介质为蔗糖时，样品分离缓冲液中蔗糖浓度为0.1～0.5mol/L；当所述介质为多聚蔗糖时，样品分离缓冲液中多聚蔗糖浓度为10％～30％。