[发明专利]快速检测沙眼衣原体双重qPCR方法及引物和探针在审
| 申请号： | 201910153964.2 | 申请日： | 2019-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN109750115A | 公开（公告）日： | 2019-05-14 |
| 发明（设计）人： | 刘和录;马彩凤;杜纪坤;窦宇红;何维娜;袁晓雪;李玉霞;赵丽君;刘平 | 申请（专利权）人： | 深圳市宝安区沙井人民医院;刘和录 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 于鹏 |
| 地址： | 518000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 沙眼衣原体 快速检测 灵敏度 扩增 引物 诊断 探针 沙眼衣原体感染 特异性计算 报告结果 核酸提取 结果判断 探针设计 样品处理 检测 合成 试验 治疗 统计 | ||
1.快速检测沙眼衣原体双重qPCR引物和探针，采用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real-time PCR，qPCR)，其特征在于：沙眼衣原体cryptic plasmid和23SrRNA基因检测引物与探针的序列与标记表为：
2.根据权利要求1所述的快速检测沙眼衣原体双重qPCR方法，其特征在于：同时检测沙眼衣原体隐性质粒的nt：1755-1880片段和23S rRNA基因的nt：51-169片段，所用引物和探针是经过我国流行分布株筛选后确定，避开变异区或突变点设计而成。
3.根据权利要求1所述的快速检测沙眼衣原体双重qPCR试剂，其特征在于：
(1)多重qPCR体系：2×PlatinumTM Multiplex PCR Mix 25.0μL、50μM的正反引物各0.3μL、10μM的探针各0.5μL、模板20.0μL，补水至终体积50.0μL；
(2)扩增参数：95℃2.5min+(95℃10s+60℃30s)×45，选择510nm和580nm通道于60℃探测荧光。
4.根据权利要求1所述的快速检测沙眼衣原体双重qPCR方法，其特征在于，鉴定结果判断方法为：
(1)鉴定标志物的扩增曲线呈“S”形，CT值＜37判为阳性；扩增曲线呈“S”形，37≤CT值＜40则再进行两次重复检测，若扩增曲线仍然为“S”形，CT值仍然＜40，也判为阳性；否则判为阴性；
(2)在多重qPCR反应中，两个鉴定标志物中的任意一个为阳性结果以及两个均为阳性结果时，该样本判为阳性样本。
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