[发明专利]内耳畸形/不完全分隔III型耳蜗畸形致病基因POU3F4突变检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种内耳畸形/不完全分隔III型耳蜗畸形致病基因POU3F4突变检测试剂盒。试剂盒包括从待测样品中提取DNA的试剂、用于扩增样本DNA的PCR反应试剂、对PCR扩增产物进行测序的试剂；所述扩增样本DNA的PCR反应试剂包括PCR引物。使用本发明所述试剂盒检测患者是否存在POU3F4基因c.456_469del14突变，从而诊断内耳畸形/不完全分隔III型耳蜗畸形发生的原因，该试剂盒将有利于临床上开展内耳畸形/不完全分隔III型患者的POU3F4突变筛查工作，为内耳畸形/不完全分隔III型耳蜗畸形患者的诊断提供依据。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体涉及在临床诊断内耳畸形/不完全分隔III型耳蜗畸形中应用的POU3F4基因突变c.456_469del14(p.Pro153Leufs187*)分型检测试剂盒。

背景技术

遗传性非综合征耳聋的遗传方式分为五种：一、常染色体显性及不完全显性，占22％；二、常染色体隐性遗传，占77％；三、X-连锁遗传；四、Y-连锁遗传；五、线粒体母系遗传。X染色体连锁引起的非综合征耳聋约占遗传性耳聋的1％-2％。目前，在X染色体上已确定的引起非综合征耳聋的基因有4个，分别是COL4A6、PRPS1、POU3F4和SMPX，其中X-连锁引起的非综合征耳聋中40％是由POU3F4基因引起的。

POU3F4基因是首个发现的导致X-连锁非综合征型耳聋的基因，人类POU3F4基因位于Xq21.1区域，仅有一个外显子，外显子区域全长1491bp，开放阅读框架全长1083bp，编码361个氨基酸。POU3F4基因是一种转录因子，属于POU结构域家族成员之一，该家族基因均含有一个POU区域。在POU区域由一个高度保守的看家区域(含60个氨基酸)和一个POU特异区(含76-78个氨基酸)组成。POU家族基因对于器官形成、细胞分化发挥着极其重要的作用，POU3F4基因与内耳的发育关系密切。Minowa等在DFN3老鼠模型中发现老鼠中耳发育正常，但是听性脑干反应阈值增加；进一步研究发现其内耳螺旋韧带中的纤维细胞发生形态学改变，而内耳中其他组织细胞没有发生变化，故认为Brn4基因(人类POU3F4基因的同源基因)突变导致纤维细胞功能异常，而纤维细胞在维持耳蜗内电位中发挥重要的作用。Phippard等研究也证明Brn4基因产物是内耳中胚层间充质的塑型关键因子，Brn4基因突变会导致耳蜗、上半规管等结构发育异常。

POU3F4基因突变会引起听力损失，其临床特征主要体现在听力学、颞骨影像学及镫骨手术中的发现三方面。POU3F4基因突变的患者通过颞骨轴位CT可能发现以下异常：①内听道异常扩大；②内听道底部与耳蜗或前庭有异常交通；③耳蜗畸形(扩大或形态异常)；④后半规管脚扩大。POU3F4基因突变的耳聋表型为传导性聋、混合性聋、感音神经性聋，尤其是镫骨底板固定，在手术时易导致外淋巴液从前庭窗涌出，发生“镫井喷”的现象。已有学者建议将“X-连锁遗传性聋伴有镫骨井喷”的影像表现型称为“不完全分隔III型”即IP-III，属于一类内耳畸形。

目前已发现POU3F4基因多种类型的突变，其中超过80％的患者表现出上述的典型临床特征。根据文献报道，POU3F4基因已有74种突变被确定，包括41种错义/无义突变、11种小片段(10bp)的缺失、3种小片段的插入，15种大片段(整个POU3F4基因)的缺失，1种大片段的插入，3种复杂的染色体重排。

在具有特征性影像学表现患者中开展POU3F4基因的全序列检测，对于明确病因、进行准确的遗传咨询以及充分的外科手术术前准备都具有非常重要的指导意义。目前尚未见到关于POU3F4基因c.456_469del14(p.Pro153Leufs187*)突变的报道，主要原因在于IP-III病例数量极低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种内耳畸形/不完全分隔III型耳蜗畸形致病基因POU3F4突变检测试剂盒。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：