[发明专利]一种用于检测肺炎克雷伯菌及三种主要碳青霉烯酶基因的引物和探针组合物及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测肺炎克雷伯菌及三种主要碳青霉烯酶基因的引物和探针组合物，其特征在于，所述三种主要碳青霉烯酶基因为KPC基因、NDM-1基因和OXA-48基因，所述肺炎克雷伯菌基因为phoE基因；所述引物和探针组合物包括分别用于检测所述KPC基因、所述NDM-1基因、所述OXA-48基因和所述phoE基因的正向引物、反向引物和探针；用于检测所述KPC基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；用于检测所述NDM-1基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.4、SEQID NO.5和SEQ ID NO.6所示；用于检测所述OXA-48基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示；用于检测所述phoE基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。

2.如权利要求1所述的一种用于检测肺炎克雷伯菌及三种主要碳青霉烯酶基因的引物和探针组合物，其特征在于，用于检测所述KPC基因和所述OXA-48基因的正向引物、反向引物和探针组成第一引物探针组合物；用于检测所述NDM-1基因和所述phoE基因的正向引物、反向引物和探针组成第二引物探针组合物。

3.如权利要求2所述的一种用于检测肺炎克雷伯菌及三种主要碳青霉烯酶基因的引物和探针组合物，其特征在于，用于检测所述KPC基因的探针的5′端标记报告荧光基团为FAM，3端标记淬灭荧光基团TAMRA；用于检测所述NDM-1基因的探针的5端标记报告荧光基团为ROX，3端标记淬灭荧光基团BHQ2；用于检测所述OXA-48基因的探针的5′端标记报告荧光基团为ROX，3′端标记淬灭荧光基团BHQ2；用于检测所述phoE基因的探针的5′端标记报告荧光基团为FAM，3′端标记淬灭荧光基团BHQ1。

4.如权利要求3所述的一种用于检测肺炎克雷伯菌及三种主要碳青霉烯酶基因的引物和探针组合物，其特征在于，所述第一引物探针组合物和所述第二引物探针组合物分别包括用于检测内标int基因的正向引物、反向引物和探针；用于检测所述内标int基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示。

5.如权利要求4所述的一种用于检测肺炎克雷伯菌及三种主要碳青霉烯酶基因的引物和探针组合物，其特征在于，用于检测所述内标int基因的探针的5’端标记荧光基团为JOE，3’端标记淬灭基团TAMRA。

6.一种用于检测肺炎克雷伯菌及三种主要碳青霉烯酶基因的试剂盒，其特征在于，所述三种主要碳青霉烯酶基因为KPC基因、NDM-1基因和OXA-48基因，所述肺炎克雷伯菌基因为phoE基因；所述试剂盒包括核酸抽提液、PCR反应酶系、内标、阴性对照品、阳性对照品、第一引物探针混合液和第二引物探针混合液；所述第一引物探针混合液包括第一引物探针组合物，所述第一引物探针组合物由用于检测KPC基因和OXA-48基因的正向引物、反向引物和探针组成；所述第二引物探针混合液包括第二引物探针组合物，所述第二引物探针组合物由用于检测NDM-1基因和phoE基因的正向引物、反向引物和探针组成；用于检测所述KPC基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；用于检测所述NDM-1基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.4、SEQID NO.5和SEQ ID NO.6所示；用于检测所述OXA-48基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示；用于检测所述phoE基因的正向引物、反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。