[发明专利]一种外周血高分子量基因组DNA的提取方法

说明书

本发明公开了一种外周血高分子量基因组DNA的提取方法。本发明提供了哺乳动物或人的离体血液基因组DNA提取方法，包括如下步骤：1)裂解哺乳动物或人的离体血液中红细胞，收集沉淀；2)用白细胞裂解液裂解1)得到的沉淀，收集沉淀；3)用蛋白酶和核糖核酸酶消化2)得到的沉淀，即得到基因组DNA。本发明提供的方法及试剂在提取血液高分子量基因组DNA方面，操作简单，成本低，可以有效的做到片段筛选分离，进而得到所需大片段DNA。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种外周血高分子量基因组DNA的提取方法。

背景技术

DNA提取是分子生物学实验中非常重要的环节，而提取的基因组DNA的分子量大小直接影响到后续实验操作能否顺利进行。随着测序技术的发展，构建单体型技术对于无创检测胎儿的遗传信息具有重要的意义。而在构建单体型的实验过程中，往往遇到由于基因组DNA完整性不好，进而带来单体型构建困难，或判断不准确的现象。所以从血液样本中提取得到高分子量的基因组DNA对于单倍体分型至关重要。

目前所存在的各种血液样本高分子量基因组DNA的提取方法主要是传统的酚氯仿抽提法，其他的方法还有：1、物理方式：玻璃珠法、超声法、冻融法；2、化学方式：异硫氰酸胍法、碱裂解法；3、生物方式：酶法等。根据分离纯化方式的不同又可分为依赖于硅脂材料分离(磁珠富集)和阴离子交换树脂法等。对于物理方式获得的基因组DNA，由于在操作过程中的剧烈震荡、研磨等，使得DNA的分子量大大的降低；而对于化学的方式，虽然得到了少量的高分子量的DNA片段，但由于化学物质的存在对后续的实验造成了一定程度的影响。

目前市面上大部分的血液提取试剂盒虽然提取操作简单，但很难获得大片段的DNA或不能对得到的基因组DNA进行片段的筛选，只保留高分子量的DNA。无法满足后续的单体型构建的实验要求，或无法分析获得正确的单体型。

综上所述，寻找一种对血液高分子量DNA提取方法对于单倍体分型检测遗传信息有着重要的生物学意义。

发明内容

为了能够提取高质量的大片段血液基因组DNA，以满足高通量测序技术为基础的单倍体分型要求，解决目前市场试剂盒提取DNA完整性不够的难题。本发明提供了如下技术方案：

本发明提供了一种哺乳动物或人的离体血液基因组DNA提取方法，包括如下步骤：

1)裂解哺乳动物或人的离体血液中红细胞，收集沉淀；

2)用白细胞裂解液裂解1)得到的沉淀，收集沉淀；

所述白细胞裂解液包括如下组分：EDTA、NaCl、KCl、Tritonx-100和蔗糖；

3)用蛋白酶和核糖核酸酶消化2)得到的沉淀，即得到基因组DNA。

在本发明的实施例中，裂解哺乳动物或人的离体血液中红细胞为向哺乳动物或人的离体血液中加入红细胞裂解液，具体用的红细胞裂解液是ACK lysising buffer(购自LIFE TECHNOLOGIES A10492-01)，步骤具体如下：

取8ml的ACK lysising buffer加入到上述装有血液的15ml离心管中，上下颠倒3次，静置3min以裂解红细胞；4℃离心，300g，5min，倾倒去上清，留管底沉淀。

上述方法中，所述白细胞裂解液中如下组分的配比为0.5-2mmol/L EDTA：130-150mmol/L NaCl：2-4mmol/L KCl：体积百分含量0.5％-2％Tritonx-100：250-450mmo/L蔗糖。

上述方法中，所述白细胞裂解液中还包括Tris；