[发明专利]一种外周血高分子量基因组DNA的提取方法

权利要求书

1.一种哺乳动物或人的离体血液基因组DNA提取方法，包括如下步骤：

1)裂解哺乳动物或人的离体血液中红细胞，收集沉淀；

2)用白细胞裂解液裂解1)得到的沉淀，收集沉淀；

所述白细胞裂解液包括如下组分：EDTA、NaCl、KCl、Tritonx-100和蔗糖；

3)用蛋白酶和核糖核酸酶消化2)得到的沉淀，即得到基因组DNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述白细胞裂解液中如下组分的配比为0.5-2mmol/L EDTA：130-150mmol/L NaCl：2-4mmol/L KCl：体积百分含量0.5％-2％Tritonx-100：250-450mmo/L蔗糖。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述白细胞裂解液中还包括Tris；

所述白细胞裂解液中各个组分的配比为0.5-2mmol/L EDTA：130-150mmol/L NaCl：2-4mmol/L KCl：体积百分含量0.5％-2％Tritonx-100：250-450mmo/L蔗糖：12-14mmol/LTris；

或，所述白细胞裂解液中各个组分的配比具体为1.0mmol/L EDTA：140mmol/L NaCl：3mmol/L KCl：体积百分含量1％Tritonx-100：350mmo/L蔗糖：13mmol/L Tris。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

所述白细胞裂解液的余量为水；

或，所述白细胞裂解液的pH值为8-8.5；

或，所述白细胞裂解液的pH值具体为8.3；

或，所述白细胞裂解液的加入体积为所述离体血液的7-9倍；

或，所述白细胞裂解液的加入体积具体为所述离体血液的8倍。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

步骤3)为向所述2)得到的沉淀中加入蛋白酶消化液和核糖核酸酶消化液；

或，所述核糖核酸酶消化液由核糖核酸酶和核糖核酸酶消化缓冲液组成；

或，所述核糖核酸酶消化缓冲液包括如下组分：Na₂HPO₄、NaCl、KCl和KH₂PO₄。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

所述核糖核酸酶消化缓冲液中如下组分的配比为1.5-2g/L Na₂HPO₄：7-9g/L NaCl：0.1-0.3g/L KCl：0.1-0.3g/L KH₂PO₄。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：

所述核糖核酸酶消化缓冲液还包括EDTA溶液；

所述核糖核酸酶消化缓冲液中各个组分的配比为1.5-2g/L Na₂HPO₄：7-9g/L NaCl：0.1-0.3g/L KCl：0.1-0.3g/L KH₂PO₄：0.01M EDTA溶液中的EDTA；

或，所述核糖核酸酶消化缓冲液中各个组分的配比具体为1.75g/L Na₂HPO₄：8.0g/LNaCl：0.2g/L KCl：0.2g/L KH₂PO₄：0.01M EDTA溶液中的EDTA；

所述核糖核酸酶消化缓冲液的余量为水；

或，所述核糖核酸酶消化缓冲液的pH值为7.5-8.5；

或，所述核糖核酸酶消化缓冲液的pH值具体为8；

或，所述核糖核酸酶消化液按照每1ml离体血液加入25-35U核糖核酸酶的量进行消化；

或，所述核糖核酸酶消化液具体按照每1ml离体血液加入29.4U核糖核酸酶的量进行消化。