[发明专利]一种DNA阻断序列组合物及其制备方法和检测系统及检测方法

权利要求书

1.一种DNA阻断序列组合物，其特征在于，包括，阻断序列A和阻断序列B；其中，所述阻断序列A可与目标DNA序列的正义链结合，所述阻断序列B可与目标DNA序列的反义链结合；且，所述阻断序列A和所述阻断序列B均包括，

(1)单链toehold序列部分：阻断序列的缺口区域，可以识别目标DNA，能与目标DNA序列互补，引发链置换反应；且，所述阻断序列A和所述阻断序列B的toehold位置不同；

(2)双链主反应部分：所述阻断序列A的主反应部分用于与所述正义链互补配对，所述阻断序列B的主反应部分用于与所述反义链互补配对；

(3)发卡序列：5′-T……T-3′，其中，“T……T”中碱基T的数量为6-10。

2.根据权利要求1所述的一种DNA阻断序列组合物，其特征在于，所述单链toehold序列部分中的toehold序列包括4-10个碱基。

3.根据权利要求1所述的一种DNA阻断序列组合物，其特征在于，所述双链主反应部分的DNA刚性段为15-30个碱基对。

4.根据权利要求1所述的一种DNA阻断序列组合物，其特征在于，所述阻断序列A和阻断序列B的摩尔比为1﹕1。

5.根据权利要求1所述的一种DNA阻断序列组合物，其特征在于，还包括，缓冲液，所述阻断序列A和阻断序列B与所述缓冲液混合，得到混合液形式的DNA阻断序列组合物。

6.如权利要求1至5中任一项所述的DNA阻断序列组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法，包括以下步骤：

分别合成阻断序列单链A和阻断序列单链B；并分别将所述阻断序列单链A和所述阻断序列单链B溶解，得A溶液和B溶液；

将所述A溶液和所述B溶液分别与退火缓冲液混合，得A退火溶液和B退火溶液；

将所述A退火溶液和所述B退火溶液分别进行退火处理，获得阻断序列A和阻断序列B。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，还包括，

将所述阻断序列A和所述阻断序列B混合，然后稀释，得到DNA阻断序列组合物。

8.一种检测系统，其特征在于，包括权利要求1至5中任一项所述的DNA阻断序列组合物和PCR扩增试剂；其中，所述PCR扩增试剂中采用无5’外切酶活性的DNA聚合酶。

9.如权利要求8所述检测系统的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

将微量目标DNA序列或携带有目标DNA序列的gDNA进行PCR预扩增反应，得到目标DNA序列的预扩增产物；

向所述目标DNA序列的预扩增产物中加入DNA阻断序列组合物，得混合溶液；

对所述混合溶液进行目标序列阻断PCR扩增，得目标序列阻断的PCR扩增产物；

对所述目标序列阻断的PCR扩增产物进行磁珠纯化，得纯化DNA产物；

对所述纯化DNA产物进行凝胶电泳表征；

对所述纯化DNA产物进行序列检测。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述混合溶液中，DNA阻断序列组合物中的阻断序列A和阻断序列B的总浓度为0.1-1μmol/L。