[发明专利]一种用于早期检测移植肾急性排异的代谢组合物、筛选方法及应用

权利要求书

1.一种代谢组合物在制备用于早期检测移植肾急性排异试剂中的应用，其特征是，所述代谢组合物由蔗糖、半乳糖肌醇、喹诺酮糖、乳糖、来苏糖5种代谢物组成。

2.一种代谢组合物的筛选方法，其特征在于，该方法用于筛选权利要求1所述的代谢组合物，包括以下步骤：

（1）从急性排异组、移植稳定组、健康对照组中获得尿液样品，对尿液样品进行预处理；

（2）样品应用超高效液相色谱系统HILIC和RPLC进行分离；

（3）经步骤（2）分离后的样品用质谱仪进行质谱分析；

（4）将原始数据进行处理，每个样品生成包含核质比、保留时间、峰面积三维信息的CSV数据；

（5）从数据库中搜索，根据匹配因子推测识别代谢物，得到可识别的代谢物；

（6）选择每个样品中均测到的代谢物的CSV数据，进行多维统计分析；

（7）根据OPLS-DA负离子模型得到变量权重值VIP，以VIP1为标准，筛选找到潜在代谢物；

（8）对步骤（7）中的潜在代谢物进行单变量统计分析，以单变量统计分析p值0.1为筛选标准，进行筛选，得到代谢组合物；

超高效液相色谱系统中，采用HILIC色谱柱，HILIC色谱柱的流动相组成 A：水+25mM乙酸铵+25mM氨水；B：乙腈；乙腈的梯度洗脱程序如下：0~1min为85%B；1~12min B从85%线性变化到65%；12~12.1min B从65%线性变化到40%；12.1~15 min B维持在40%；15~15.1min B从40%线性变化到85%；15.1~20min B维持在85%。

3.根据权利要求2所述的一种代谢组合物的筛选方法，其特征在于， 步骤（2）中，柱温25℃，流速300μL/min，进样量300μL，整个分析过程中样品置于4℃自动进样器中。

4.根据权利要求2所述的一种代谢组合物的筛选方法，其特征在于， 步骤（3）中，质谱分析分别采用电喷雾电离正离子和负离子模式进行检测。

5.根据权利要求2所述的一种代谢组合物的筛选方法，其特征在于， 步骤（5）中，设定匹配因子在80%之上的化合物为可识别。

6.根据权利要求2所述的一种代谢组合物的筛选方法，其特征在于， 步骤（6）中多维统计分析包括无监督的PCA分析和有监督的PLS-DA分析和OPLS-DA分析方法。

7.根据权利要求2所述的一种代谢组合物的筛选方法，其特征在于，还包括步骤（9）对代谢组合物先采用HMDB数据库检索比对，再结合KEGG对差异性代谢通路进行分析。