[发明专利]一种同时检测血液中多种脂溶性维生素的方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种同时检测血液中多种脂溶性维生素的方法和试剂盒，采用LC‑MS法进行检测，具体检测维生素A、25(OH)D2、25(OH)D3或E中的任意两种或两种以上脂溶性维生素；色谱条件为，洗脱液A：甲醇溶液，洗脱液B：2mmol/L乙酸铵、0.1％甲酸水溶液；质谱条件为，电喷雾法将维生素分子软电离。本发明通过电喷雾法将维生素分子软电离，形成多种不同质荷比的离子对，通过与已知浓度的维生素内标参比，算出待测维生素浓度，一次进样，同时检测血清中多种脂溶性维生素的含量，采用本发明的方法和试剂盒检测，具有更高的精密度和准确度；本试剂盒的内标液可同时达到加入参比和去蛋白的作用，能节省操作步骤。

技术领域

本发明属于维生素的检测领域，具体涉及一种同时检测血液中多种脂溶性维生素的方法和试剂盒。

背景技术

维生素(vitamin)是人和动物为维持正常的生理功能而必需从食物中获得的一类有机物质，在人体生长和代谢过程中发挥着极其重要的作用。机体缺乏维生素将引起代谢障碍，并发生各种疾病，这类疾病统称为维生素缺乏症。

目前，根据溶解性可将维生素分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类，水溶性维生素包括B族维生素和维生素C等；脂溶性维生素包括维生素A、D、E和K等。

脂溶性维生素中，维生素A是视网膜中感光细胞的感光物质的主要成分，维生素A缺乏会导致干眼症，对于成人，维生素A缺乏时易导致夜盲症；维生素D(Vit D)对人类健康特别是儿童健康具有重要意义，Vit D缺乏性佝偻病是我国儿童重点防治的四病之一，临床发现Vit D缺乏性佝偻病除骨骼病变外，同时可影响神经、肌肉、造血及免疫等组织器官的功能；维生素E有抗氧化的作用，能防止不饱和脂肪酸的自身氧化，因而有保护生物膜的功能，使生物膜中的不饱和脂肪酞不致于因氧化变硬，使膜遭到破坏；维生素K对正常的血液凝结有重要作用，缺乏维生素K会出现血凝缓慢，甚至可导致大出血。

现有技术中，常用的维生素检测方法主要包括酶联免疫分析法、化学免疫发光法、高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)等。免疫法检测时所用的抗体，也可识别其它维生素衍生物，且抗体抗原反应通常不足100，因此结果差异较大，特异性较差，应用于临床检测可靠性不高，尤其是对于检测含量较低的维生素；液相色谱法由于检出限有限，主要用于维生素含量较高的样品测定，一般只能进行单组份或含量较高的几个组分的同时测定；目前的液相色谱-质谱法只能对一种或两种维生素做定性分析，由于血浆/血清成分复杂，且维生素含量较低，在进行定量分析时，杂质严重影响检测结果的准确性，因此，为了降低检测时的基质效应，使用者都是对不同的维生素逐个检测分析，因此，存在检测成本高、操作复杂、耗费时间长和检测需要的血量多等缺陷。

迄今为止，尚未见到一种能够同时检测血液中多种脂溶性维生素的有效方法。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中存在的无法同时检测血液中多种脂溶性维生素的问题，提供一种同时检测血液中多种脂溶性维生素的方法和试剂盒。

本发明采用如下技术方案：

一种同时检测血液中多种脂溶性维生素的方法，采用LC-MS法进行检测。

在上述技术方案中，所述多种脂溶性维生素为维生素A、25(OH)D2、25(OH)D3或E中的任意两种或两种以上。

在上述技术方案中，所述血液为血清。

在上述技术方案中，所述LC-MS法的条件为：

色谱条件：洗脱液A：甲醇溶液，洗脱液B：2mmol/L乙酸铵、0.1％甲酸水溶液；

质谱条件：电喷雾法将维生素分子软电离。

进一步地，在上述技术方案中，在所述LC-MS法中，

色谱条件如下：