[发明专利]一种同时检测血液中多种脂溶性维生素的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测血液中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于，采用LC-MS法进行检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多种脂溶性维生素为维生素A、25(OH)D2、25(OH)D3或E中的任意两种或两种以上。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血液为血清。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LC-MS法的条件为：

色谱条件：洗脱液A：甲醇溶液，洗脱液B：2mmol/L乙酸铵、0.1％甲酸水溶液；

质谱条件：电喷雾法将维生素分子软电离。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述LC-MS法中，

色谱条件如下：

色谱柱：Shim-pack GIST C18 2.1*50mm，3μm，柱温：40℃；洗脱液A：甲醇溶液，洗脱液B：2mmol/L乙酸铵、0.1％甲酸水溶液；梯度洗脱条件：0-3.5min，70％A，3.5-5min，100％A，5-5.1min，100％A，5.1-6min，70％A，流速0.40mL/min，进样量10μL；

质谱条件：

电喷雾法将维生素分子软电离，雾化气：62.5kPa，加热气：50kPa，气帘气：22kPa，喷雾电压：5000V，去溶剂温度：550℃。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，具体步骤包括：

S1、样品处理：将待测血液与内标液混匀后离心，取上清液层，并加入萃取剂混匀后离心，再次取上清液层，吹干，加入稀释剂混匀后采用串联质谱法进行检测，通过比较维生素和维生素内标的离子强度来得出待测血清中脂溶性维生素的含量；

S2、标准工作液的配制：使用甲醇进行配制；

S3、LC-MS检测：通过电喷雾法将维生素分子软电离，形成多种不同质荷比的离子对，通过与已知浓度的维生素内标参比，算出待测维生素浓度，对待测物质进行定性与定量检测。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述萃取剂为正己烷。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为70％v/v的甲醇水溶液。

9.一种同时检测血液中多种脂溶性维生素的试剂盒，其特征在于，包括：具有不同浓度梯度的混合标准品溶液，无水乙醇，正己烷，70％甲醇水溶液，甲醇，2mmol/L乙酸铵、0.1％甲酸水溶液，质控。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述多种脂溶性维生素为维生素A、25(OH)D2、25(OH)D3和E。