[发明专利]鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记及其应用

说明书

本发明提供了一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记，SSR分子标记为5对SSR标记引物VMC7h3、Scu15vv、Vchr13a、UDV‑088和VrZAG67，还提供了其应用，父本巨峰、母本新郁和新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的DNA提取，建立PCR反应体系及扩增反应程序，进行PCR产物的电泳分离后，对依次用5对SSR标记引物对杂交种真实性进行鉴定。本发明通过前期筛选的5对SSR标记引物用于鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种，能鉴定出真杂交种，能快速检验新郁葡萄和巨峰葡萄杂交工作成效，并提前剔除假杂交种后代，有利用提高育种效率，节约成本。

本发明属于杂交种鉴定技术领域，具体涉及一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记及其应用。

背景技术

葡萄育种主要有杂交、实生选种、芽变、诱变等方法。杂交育种是葡萄育种的重要途径。这种方式是在人工控制下，通过两个不同基因型品种的配子结合而获得新品种。通过这种方式可以将多个目标性状结合在一起，满足现代育种目标的综合性，比如，抗逆(病、旱、寒)无核、香味无核、丰产香味大粒等。葡萄品种大多为两性花，既可以自交结实，也可以异花授粉。开展杂交工作，要先将母本花的雄蕊去除干净，并排除其它外来花粉干扰，才能保证杂交的有效性、真实性。同时，也要保证父本花粉的活力。

新郁葡萄是一个红色、大粒的中晚熟制干鲜食兼用的品种，该品种抗旱性强，巨峰葡萄是一个黑紫色、大粒、草莓香味的早中熟四倍体欧美杂交种品种，该品种抗病性强，配制新郁×巨峰杂交组合，有望获得大粒、深色、有香味、高抗性的后代，但两个品种属于二倍体与四倍体间的杂交，加之葡萄杂合性高，容易自花授粉结实，后代的杂交真实性需要进行验证。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记及其应用，本发明通过前期筛选的5对SSR标记引物VMC7h3、Scu15vv、Vchr13a、UDV-088和VrZAG67对用于鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种，葡萄是具有高度杂合基因的多年生植物，杂交后代的性状差异较大，利用SSR分子标记鉴定杂交后代比作物、蔬菜、西甜瓜等具有纯合性亲本的植物要复杂的多，根据孟德尔遗传规律，1个分子标记能完成群体一半的鉴定，依次递减，葡萄的杂交群体纯度的鉴定至少需要5个特异的SSR分子标记才能完成，本发明通过5对SSR标记引物，对新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的杂交群体进行鉴定，鉴定出真杂交种，能快速检验新郁葡萄和巨峰葡萄杂交工作成效，并提前剔除假杂交种后代，有利用提高育种效率，节约成本。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记，所述SSR分子标记为5对SSR标记引物，分别命名为VMC7h3、Scu15vv、Vchr13a、UDV-088和VrZAG67；

VMC7h3的核苷酸序列为TCAGATATTGAAGAACACCACA和ACTAGAAAATGCACAATCTCCC；

Scu15vv的核苷酸序列为GCCTATGTGCCAGACCAAAAAC和TTGGAAGTAGCCAGCCCAACCTTC；

Vchr13a的核苷酸序列为TGGCAGAGCAAATGAATCAA和TTGGATGGATTGGAATGACC；

UDV-088的核苷酸序列为CCATGCACACACGCACAT和CCACCAAACAAGTGGAGGTT；

VrZAG67的核苷酸序列为ACCTGGCCCGACTCCTCTTGTATGC和TCCTGCCGGCGATAACCAAGCTATG。

本发明还提供了上述的鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记的应用，利用SSR分子标记鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种，包括以下步骤：

S1、父本巨峰、母本新郁和新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的DNA提取；

S2、建立PCR反应体系及扩增反应程序；