[发明专利]鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记及其应用

权利要求书

1.一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记，其特征在于，所述SSR分子标记的SSR标记引物为5对SSR标记引物，分别命名为VMC7h3、Scu15vv、Vchr13a、UDV-088和VrZAG67；

VMC7h3的核苷酸序列为TCAGATATTGAAGAACACCACA和ACTAGAAAATGCACAATCTCCC；

Scu15vv的核苷酸序列为GCCTATGTGCCAGACCAAAAAC和TTGGAAGTAGCCAGCCCAACCTTC；

Vchr13a的核苷酸序列为TGGCAGAGCAAATGAATCAA和TTGGATGGATTGGAATGACC；

UDV-088的核苷酸序列为CCATGCACACACGCACAT和CCACCAAACAAGTGGAGGTT；

VrZAG67的核苷酸序列为ACCTGGCCCGACTCCTCTTGTATGC和TCCTGCCGGCGATAACCAAGCTATG。

2.一种如权利要求1所述的鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记的应用，其特征在于，利用SSR分子标记鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种，包括以下步骤：

S1、父本巨峰、母本新郁和新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的DNA提取；

S2、建立PCR反应体系及扩增反应程序；

S3、PCR产物的电泳分离；

S4、杂交种真实性的鉴定；先用SSR标记引物Vmc7h3在新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的杂交群体中筛选出携带父本特异性基因的条带的杂交种，然后用SSR标记引物Scu15vv在通过SSR标记引物Vmc7h3筛选后剩余的新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的杂交群体中继续筛选出携带父本特异性基因的条带的杂交种，再用SSR标记引物Vchr13a在通过SSR标记引物Scu15vv筛选后剩余的新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的杂交群体中继续筛选出携带父本特异性基因的条带的杂交种，然后用SSR标记引物UDV-088在通过SSR标记引物Vchr13a筛选后剩余的新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的杂交群体中继续筛选出携带父本特异性基因的条带的杂交种，最后用SSR标记引物VrZAG67在通过SSR标记引物UDV-088筛选后剩余的新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的杂交群体中继续筛选出携带父本特异性基因的条带的杂交种，依次经过5对SSR标记引物筛选，携带父本特异性基因的条带的杂交种为真杂交种，经过5对SSR标记引物筛选后仍不具有携带父本特异性基因的条带的杂交种基本可以视为假杂交种。

3.根据权利要求2所述的一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记的应用，其特征在于，S1中所述DNA提取的方法为采用改良的CTAB法，分别提取父本巨峰、母本新郁和新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的叶片的DNA，通过琼脂糖凝胶电泳，检测DNA的片段长度、浓度和纯度，用于PCR扩增。

4.根据权利要求3所述的一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记的应用，其特征在于，所述父本巨峰、母本新郁和新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的叶片的DNA置于-20℃保存。

5.根据权利要求2所述的一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记的应用，其特征在于，S2中所述PCR反应体系为：PCR MiX混合液10μL、100μL/mL的SSR标记引物0.8μL、浓度为20ng/μL的DNA模板2.0μL、ddH₂O7.2μL。

6.根据权利要求2所述的一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记的应用，其特征在于，S2中所述扩增反应程序为：94℃预变性4min；94℃变性40s，45℃～65℃退火1min，72℃延伸1min，进行35个循环；最后一个循环72℃延伸10min，停止于4℃。

7.根据权利要求2所述的一种鉴定新郁葡萄和巨峰葡萄杂交种的SSR分子标记的应用，其特征在于，S3中所述PCR产物的电泳分离的方法采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；所述非变性聚丙烯酰胺凝胶中聚丙烯酰胺凝胶的质量分数为8％。