[发明专利]一种PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测方法

权利要求书

1.一种PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有抗体A、抗体B、多孔泡沫金属填充的中空柱和磁铁，所述抗体A为化学发光分子或能使底物发光的酶标记的外泌体抗体，所述抗体B为磁珠标记的外泌体抗体；所述抗体A和抗体B中至少有一种为外泌体PD-L1抗体。

2.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述多孔泡沫金属为多孔泡沫铁、多孔泡沫钴或多孔泡沫镍；

优选地，所述多孔泡沫金属的孔洞的直径为10um-100um。

3.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光分子为吖啶脂；所述能使底物发光的酶为辣根过氧化物酶。

4.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠为顺磁磁珠，直径为10nm-1000nm。

5.化学发光分子或能使底物发光的酶标记的外泌体抗体以及磁珠标记的外泌体抗体用于制备检测PD-L1外泌体试剂中的应用，其特征在于，含有以下步骤：

(1)样品孵育：将待测样品与抗体A和抗体B充分混合后，进行孵育得到靶标复合物；所述抗体A为化学发光分子或能使底物发光的酶标记的外泌体抗体，所述抗体B为磁珠标记的外泌体抗体；所述抗体A和抗体B中至少有一种为外泌体PD-L1抗体；所述靶标复合物为抗体A、PD-L1外泌体和抗体B形成的双抗体夹心复合物；

(2)磁吸分离：将磁铁吸附到多孔泡沫金属填充的中空管外壁，使所述多孔泡沫金属置于磁场环境中；再将步骤(1)得到的孵育液通过多孔泡沫金属填充的中空管，使所述双抗体夹心复合物吸附于多孔泡沫金属上；

(3)洗脱双抗体夹心复合物：用缓冲液清洗多孔泡沫金属填充的中空管的内腔；再撤去多孔泡沫金属填充的中空管外壁的磁铁，并洗脱得到双抗体夹心复合物；

(4)检测发光强度：检测步骤(3)洗脱获得的双抗体夹心复合物的发光强度或双抗体夹心复合物使底物发光的强度，计算待测样品中外泌体PD-L1抗体的浓度。

6.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述多孔泡沫金属为多孔泡沫铁、多孔泡沫钴或多孔泡沫镍；

优选地，所述多孔泡沫金属中孔洞的直径为10um-100um。

7.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述化学发光分子为吖啶脂，所述能使底物发光的酶为辣根过氧化物酶。

8.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述磁珠为顺磁磁珠，直径为10nm-1000nm。

9.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述步骤(2)中利用吸液装置或移液枪，以上下来回吸取方式，将步骤(1)得到的孵育液通过多孔泡沫金属填充的中空管，使所述双抗体夹心复合物吸附于多孔泡沫金属上。

10.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述步骤(3)中利用吸液装置或移液枪，以上下来回吸取方式，清洗多孔泡沫金属填充的中空管的内腔。