[发明专利]一种同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的方法

说明书

本发明提供一种同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的方法，具体步骤包括：A、提取液制备：防己药材粉碎，称取适量药粉，2％盐酸甲醇提取，常温超声，中速滤纸初滤，取滤液用微孔滤膜过滤，得提取液。提取液以粉防己碱和防己诺林碱为对照品；B、调节高效液相色谱仪检测条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Extend‑C18(4.6×250mm，5μm)，流动相乙腈‑0.08％三乙胺水(75∶25)，等度洗脱，进样量8μl，流速1.0mL·min‑1，柱温25℃，检测波长282nm；C、进样，等待供试品及对照品结果，按外标法以峰面积计算，分别计算各供试品中粉防己碱和防己诺林碱组分的含量。经过长期反复验证，确证本方法准确度、精密度、专属性高，色谱条件耐用性良好。

技术领域

本发明属中药的含量测定方法领域，具体涉及一种同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的方法。

背景技术

防己，为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根，具有利水消肿、祛风止痛的功效。粉防己碱和防己诺林碱为防己药材的主要化学成分。研究表明，粉防己碱具有抗尘肺、抗癌、抗类风湿性关节炎、抗肿瘤、抗多药耐药等多种药理作用。防己诺林碱在抗肿瘤、抗癌、抑制增生性瘢痕等方面有显著的生物活性。目前，中药市场上防己存在一个严重的问题，即流通的防己药材存在质量参差不齐，含量水平的高低可能会直接影响防己药材的质量和疗效，建立防己中主要成分的定量分析方法可为防己药材质量的检测提供方法。

2015版《中国药典》提供了有关防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的测定方法，但该法流动相含有十二烷基磺酸钠，起泡多，消除泡沫时间长，且溶解温度要求严格，操作复杂。流动相混合可有效减少消除泡沫的时间，但混合流动相适合单通道进样，对于新的多通道进样液相色谱仪，该操作方法已不具优势。鉴于《中国药典》方法所存在的缺陷，许多人对流动相进行改进试验，但不同文献报道的方法具有差异，且都存在流动相复杂的缺陷。

鉴于以上问题，本发明的目的旨在减少色谱条件中流动相的数量，简化流动相配制程序，为防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的同时测定提供高效、低耗、简便的方法，也为防己人工种植药材的良种选育、品种改良、资源利用等提供检测方法。

发明内容

本发明提供了一种同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的高效液相色谱方法。该方法在原有的2015版药典法和历年文献报道测定粉防己碱和防己诺林碱含量方法的基础上进行整合和改良，大大缩短了提取时间，减少提取溶剂的使用，降低了提取成本；测定时一针多测，高效快速；经过反复验证后，本方法准确度、精密度、专属性高，色谱条件耐用性良好。

本发明通过以下技术方案实现：

1.本发明原料为防己药材，其制备方法为：采集防己根，洗净，除去粗皮，晒至半干，切成片状，60℃烘箱干燥，置于密封袋保存。药材通过粉碎机粉碎后过三号筛，置冰箱保存备用。

本发明使用的提取液为：2％盐酸甲醇。

本发明采用的提取方法为：取防己药材粉末约0.5g，精密称定，精密加入2％盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，常温超声30min，取出，放冷，再称定重量，用提取液液补足减失的重量，摇匀。

本发明粉防己碱和防己诺林碱含量测定方法为：高效液相色谱测定法。

本发明高效液相色谱法待测溶液的制备方法为：上述摇匀后的提取液，采用中速滤纸进行初滤，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。后用0.45μm微孔滤膜过滤，制成待测溶液。

2.调节高效液相色谱仪检测条件

色谱柱为Agilent ZORBAX Extend-C18。

流动相为乙腈(A相)-三乙胺的缓冲水溶液(B相)。

等度洗脱：75∶25。