[发明专利]用于生成对抗细胞表面抗原的结合剂的方法和组合物

说明书

本发明提供了用于识别结合多肽(例如抗体或其抗原结合片段)的方法和组合物，其中所述的结合多肽特异性地结合细胞表面抗原。本发明的方法总体而言包括将结合多肽的多样的核酸展示文库与细胞外部表面上的细胞表面抗原接触；以及由所述的文库分离至少一种文库的成员，该成员特异性地结合所述的细胞的外部表面上的细胞表面抗原。本发明还提供了用于本发明的方法中的新的核酸展示文库(例如DNA展示文库)。

本申请是申请日为2014年9月22日、申请号为2014800521774、发明名称为“用于生成对抗细胞表面抗原的结合剂的方法和组合物”的发明专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求2013年9月23日提交的美国临时申请No.61/881,203的优先权，该申请的内容以引用方式全部并入本文。

背景技术

结合多肽(例如抗体及其片段)作为治疗剂和诊断剂在商业上是重要的。用于结合多肽的传统的筛选方法通常使用可溶性的抗原。然而，对于某些细胞表面抗原而言，当该抗原由原生质膜上溶解时，在这些抗原上的构象表位改变，从而导致不能生成可以识别天然抗原的结合多肽。因此，本领域需要用于结合多肽的新的筛选方法，其中所述的结合多肽在它们的天然构象下可以特异性地结合细胞表面抗原。

发明概述

本发明提供了用于识别特异性结合细胞表面多肽的结合多肽(例如抗体或其抗原结合片段)的方法和组合物。本发明的方法总体而言包括将结合多肽的多样的核酸展示文库与细胞外部表面上展示的细胞表面抗原接触；以及由所述的文库分离至少一种文库的成员，该成员与细胞外部表面上的细胞表面抗原特异性地结合。本发明的方法和组合物是特别有利的，原因在于它们允许快速地识别与天然形式的靶细胞表面抗原结合的结合多肽，以及具有新的表位特异性和功能性质(例如内化、激动、拮抗或变构调控性质)的结合多肽。这些方法和组合物还允许识别新的治疗用途的细胞类型特异性抗原或表位。本发明还提供了新的V-结构域(例如VH和/或VL结构域)核酸展示文库(例如DNA展示文库)，其可以用于筛选新的结合多肽。

本发明还涉及以下项目：

1.一种识别特异性结合细胞表面抗原的结合多肽的方法，该方法包括：

a.将第一细胞类型与结合多肽的多样的核酸展示文库接触，其中所述的第一细胞类型在外部表面上展示细胞表面抗体；以及

b.由所述的文库分离至少一种文库的成员，由此识别特异性地结合所述的细胞表面抗原的结合多肽，其中所述的文库的成员特异性地结合在所述的第一细胞类型的外部表面上的细胞表面抗原。

2.项目1所述的方法，其中在步骤(a)之前，将所述的结合多肽的多样的核酸展示文库与第二细胞类型接触，其中所述的第二细胞类型未展示在所述的外部表面上展示的抗原。

3.一种使用特异性地结合细胞表面抗原的结合多肽的方法，该方法包括：

a.将第一细胞类型与结合多肽的多样的核酸展示文库接触，并由所述的文库分离至少一种特异性地结合所述的第一细胞类型的文库的成员，其中所述的第一细胞类型在所述的外部表面上展示细胞表面抗原；

b.将第二细胞类型与结合多肽的多样的核酸展示文库接触，并由所述的文库分离至少一种特异性地结合所述的第二细胞类型的文库的成员，其中所述的第二细胞类型未展示在所述的外部表面上的细胞表面抗原；以及

c.选择特异性地结合所述的第一细胞类型、但不结合所述的第二细胞类型的文库的成员，由此识别特异性地结合所述的细胞表面抗原的结合多肽。

4.项目3所述的方法，其中步骤(a)和(b)是使用所述的文库的分离的等分物平行实施的。

5.一种识别特异性地结合细胞表面抗原的结合多肽的方法，该方法包括：