[发明专利]用于生成对抗细胞表面抗原的结合剂的方法和组合物

权利要求书

1.一种识别特异性地结合细胞表面抗原的结合多肽的方法，该方法包括：

(a).将第一细胞类型与结合多肽的多样的无细胞核酸展示文库接触，由此形成结合多肽/抗原复合物的群体，其中所述的第一细胞类型在其外部表面上展示所述的细胞表面抗原；

(b).将所述的第一细胞类型与表面活性剂接触，从而所述的结合多肽/抗原复合物的群体溶解；以及

(c).分离所述的溶解的结合多肽/抗原复合物的群体，由此分离特异性地结合在所述的第一细胞类型的外部表面上的细胞表面抗原的至少一种文库的成员，由此识别特异性地结合所述的细胞表面抗原的结合多肽，

其中所述的细胞表面抗原选自胰高血糖素受体(GCGR),CXCR1,CXCR2,CXCR3,CXCR4,CXCR6,CCR1,CCR2,CCR3,CCR4,CCR5,CCR6,CCR8,CFTR,CIC-1,CIC-2,CIC-4,CIC-5,CIC-7,CIC-Ka,CIC-Kb,Bestrophins,TMEM16A,GABA受体,甘氨酸受体,ABC转运蛋白,NAV1.1,NAV1.2,NAV1.3,NAV1.4,NAV1.5,NAV1.6,NAV1.7,NAV1.8,NAV1.9,鞘氨醇-l-磷酸受体和NMDA通道。

2.权利要求1所述的方法，进一步包括：

(d).将第二细胞类型与所述结合多肽的多样的无细胞核酸展示文库接触，并由所述的文库分离至少一种特异性地结合所述的第二细胞类型的文库的成员，其中所述的第二细胞类型未展示在其外部表面上的细胞表面抗原；以及

(e).选择特异性地结合所述的第一细胞类型、但不结合所述的第二细胞类型的文库的成员。

3.权利要求1所述的方法，其中步骤(a)中的接触发生在允许所述的细胞表面抗原内化的条件下，并由此形成内化的结合多肽/抗原复合物的群体，所述方法进一步包括洗涤所述的第一细胞类型，从而除去与所述的外部表面结合的文库成员；并且其中步骤(c)中的分离包括使用对所述结合多肽的一部分具有特异性的结合剂来分离所述的内化的结合多肽/抗原复合物，由此识别特异性地结合所述的细胞表面抗原的内化结合多肽。

4.权利要求1所述的方法，进一步包括：

在步骤(a)之前，在一定的条件下将所述的抗原与参照结合剂接触，从而形成所述的抗原和所述的参照结合剂的复合物，

其中所述的参照结合剂特异性地结合所述的抗原的不同于所述的结合多肽所识别的表位，从而在步骤(a)中形成至少一种结合多肽/抗原的复合物；

从而步骤(c)包括识别结合多肽，该结合多肽特异性地结合所述的抗原的不同于所述的参照结合剂所识别的表位。

5.权利要求1所述的方法，进一步包括：

在步骤(a)之前，将所述的第一细胞类型与结合剂接触，该结合剂特异性地结合所述的细胞表面抗原并调控所述的细胞表面抗原的激活状态；

从而步骤(c)包括识别特异性地结合所需的激活状态的细胞表面抗原的结合多肽。

6.权利要求1-5的任意一项所述的方法，其中所述的多样的无细胞核酸展示文库为V结构域文库，该文库的各个成员均包含由第一抗体得到的FR1-FR3区的序列和由第二抗原得到的CDR3-FR4区的序列。

7.权利要求6所述的方法，其中所述的FR1-FR3区的序列和/或所述的CDR3-FR4区的序列得自人类的天然免疫谱型，和/或所述的V结构域为VH结构域。

8.权利要求1-5的任意一项所述的方法，其中所述的多样的无细胞核酸展示文库为无细胞DNA展示文库。

9.权利要求8所述的方法，其中所述的无细胞DNA展示文库的各个成员均包含通过插入的DNA连接体与编码所述的结合多肽的DNA编码序列连接的结合多肽，其中所述的DNA连接体包含限制性核酸内切酶位点。

10.权利要求9所述的方法，其中所述的限制性内切酶位点不存在于所述的无细胞DNA展示文库的成员的编码序列中。